О возможности использования содержимого костного канала длинных трубчатых костей для определения половой принадлежности по y-хроматину

Publication in electronic media: 02.02.2013 under http://journal.forens-lit.ru/node/823
Publication in print media: Актуальные вопросы судебной медицины и экспертной практики, Барнаул-Новосибирск 2012 Вып. 18

г.Барнаул

Идентификация личности всегда была в круге интересов судебно-медицинской науки и практики. Её актуальность в настоящее время во всем мире, и особенно в России еще более возросла. Это связано с участившимися природными и техногенными катастрофами, а в нашей стране еще и из-за сложного экономического положения (после распада Союза) и криминализации общества. Опознавание личности чаще связано с исследованием трупов, реже – живых лиц. Следует отметить, что идентификация личности один из сложных разделов экспертной практики, особенно если объектом исследования являются гнилостно измененные или скелетированые трупы, отдельные кости или их фрагменты. Одним из вопросов, решаемых экспертом для отождествления личности, является определение пола неизвестного лица. Его решением занимаются эксперты медико-криминалистических и биологических подразделений Бюро судебно-медицинской экспертизы. При судебно-биологическом исследовании решение этого вопроса может быть проблематичным ввиду отсутствия пригодного материала.

Целью нашего исследования явилось изучение возможностей определения половой принадлежности по Y-хроматину. Y-хроматин представляет собой свечение дистальных отделов длинных плеч Y-хромосомы. В клеточных ядрах, находящихся в интерфазе, при окраске акрихином и его аналогами, хроматин имеет вид ярко флюоресцирующей глыбки величиной 0,2-0,8мкм. Материалом исследования послужило содержимое костномозгового канала бедренной кости 48 биоманекенов лиц обоего пола. Из них 25 – у лиц зрелого возраста (мужчины – 22-60 лет, женщины – 21-55 лет), 15 – пожилого (мужчины – 61-74 лет, женщины – 56-74 лет) и 8 – старческого (75-90 лет), умерших от различных причин, не связанных с патологией костного мозга. Исследованы проксимальная и средняя трети диафиза бедренных костей. Для контроля клеточного состава содержимого костномозговой полости использовали среднюю треть тела грудины. Следует отметить, что при изучении содержимого костномозгового канала средней трети диафиза трубчатой кости редко удавалось выявить пригодные клетки. В связи с этим, исследовали проксимальную треть костномозгового канала, т.к. по нашему мнению, именно в них мог сохраниться необходимый клеточный состав. Основанием данного выбора послужили также процессы происходящие в онтогенезе, а именно: заполнение красным мозгом в детском возрасте эпифизов, диафизов трубчатых костей и диплоэтического вещества плоских костей, а начиная с 4-5 лет красный костный мозг постепенно замещается жировой тканью (жёлтый костный мозг). Жировые клетки красного костного мозга не являются жировым депо организма, так как при голодании содержание жира в них не снижается, они несут определенные, связанные с кроветворением функции и являются его необходимым элементом. Желтый костный мозг представляет собой перерожденную ретикулярную строму с жировыми включениями. У взрослого человека красный костный мозг сохраняется только в ячейках губчатого вещества плоских костей (череп, грудина, крылья подвздошных костей), в губчатых костях (диплоэтическое вещество позвонков, ребер), эпифизах трубчатых костей.

Диагностика половой принадлежности клеток костного мозга бедренной кости и тела грудины по У-хроматину проводилась по методике предложенной при работе с цитологическими препаратами А.Л. Федоровцевым с соавторами (2009г.). Фрагмент марлевого бинта с высушенным на нем в течении 24 часов веществом костномозговой полости фрагментов тела грудины и проксимальной трети канала бедренной кости, помещали в центрифужные пробирки и на 18 часов заливали с избытком 10% раствором уксусной кислоты. Затем фрагмент бинта тщательно отжимали в пробирках и удаляли, а пробирки с экстрактом центрифугировали в течение 5-10 мин. при 1500 об/мин. Надосадочную жидкость осторожно отсасывали пастеровскими пипетками, осадки ресуспензировали, добавляли новые порции 10% уксусной кислоты, и вновь центрифугировали при тех же режимах. Осадки неоднократно (не менее 3-х раз) промывали до получения прозрачной надосадочной жидкости. Далее надосадочную жидкость отсасывали, оставляя небольшой слой над осадком. После ресуспензирования осадок полностью в виде капель переносили пипеткой на предметное стекло. С каждого объекта исследования готовили не менее 3-х препаратов. Препараты высушивали при комнатной температуре, в течение 10 мин. фиксировали 70% этиловым спиртом, далее окрашивали 0,001% акрихином в течение 10 мин. и промывали 10-15 сек. водопроводной водой.

Анализ исследованного материала позволил выявить следующее. В процессе возрастного замещения в проксимальной части костномозгового канала остаются не только жировые клетки, но и скопления зрелых клеток крови: эритроцитов, клеток белой крови, макрофагов. Вероятно, это явление обусловлено:

• остаточным сохранением сосудистой сети от гемопоэтически активного красного костного мозга в проксимальных частях желтого мозга;
• непосредственной близостью к эпифизу кости, содержащего красный костный мозг.

В ядросодержащих клетках, находящихся в содержимом костномозгового канала бедренной кости, установлено наличие Y-хроматина. При этом количество клеток с Y-хроматином сильно варьировало в зависимости как от количества найденных клеток, так и возраста потерпевшего, времени его смерти. В процессе исследования было установлено:

• при наличии пригодных для исследования клеток большее их количество обнаружено в проксимальной части костномозгового канала бедренной кости;
• максимальное количество ядросодержащих клеток, пригодных для выявления Y-хроматина, выявлялось у лиц зрелого возраста.

В некоторых наблюдениях клетки, пригодные для определения половой метки и вовсе отсутствовали как в проксимальной, так и в средней третях костномозгового канала бедренной кости и тела грудины. Следует отметить, что это отмечено у лиц зрелого возраста с апластическим состоянием костного мозга. Результаты исследования представлены в табл. 1.

Таблица 1 Локализации клеточного содержимого в костномозговых полостях тела грудины и бедренной кости

Известно, что из-за позднего проникания микроорганизмов гнилостные изменения в костном мозге наступает позже, по сравнению с другими тканями. Поэтому нами проведены исследования гнилостно измененного содержимого костномозгового канала верхней трети бедренной кости (15 экспериментов). Наблюдение проводили на 7, 14, 21 сутки после наступления смерти. Анализ материала показал, что результаты исследования на 7 день не отличалась от данных, полученных на неизмененном материале. На 14 и 21 сутки обнаруженная хроматиновая субстанция ядер клеток не удовлетворяла критериям пригодности для их исследования. Сеть нуклеоплазмы становилась нечеткой, гомогенной, происходило ослабление окраски ядер. В большинстве исследуемых препаратов микроорганизмы отсутствовали, что связано с происходящими аутолитическими процессами в костномозговом канале.

Таким образом, результаты наших исследований показали, что более информативным материалом для установления половой принадлежности является содержимое костномозгового канала верхней трети бедренной кости. При отсутствии выраженных гнилостных изменений в клетках возможно установление половой принадлежности по Y-хроматину.

Список литературы

1. Федоровцев А.Л., Ревнитская Л.А., Королева Е.И., Эделев Н.С. Судебно-медицинские цитологические исследования следов на вещественных доказательствах. Нижний Новгород, 2009г.– 152 с.
2. Воробьев А.И. Руководство по гематологии. – М., 2002г.– 280 с.
3. Абрикосов А.И. Частная патологическая анатомия. – Москва-Ленинград, 1947г.– 284с.