Практические аспекты использования базы данных «БД-2003» в проведении скрининга методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Publication in electronic media: 02.02.2013 under http://journal.forens-lit.ru/node/825
Publication in print media: Актуальные вопросы судебной медицины и экспертной практики, Барнаул-Новосибирск 2012 Вып. 18

г. Петропавловск-Камчатский

Обычная стратегия аналитической процедуры химико-токсикологического (судебно-химического) анализа включает на первом этапе скрининговые тесты, на втором этапе – подтверждающий анализ проб, дающих положительные реакции при скрининге, вторым независимым методом с количественным определением идентифицируемого вещества.

Выбор аналитических методов для скрининга определяется целью анализа – за короткий промежуток времени добиться минимума отрицательных и максимума положительных результатов – и связан с такими параметрами анализа, как чувствительность и специфичность. Кроме того, для скрининга необходимо использовать методы, обладающие высокой производительностью, высоким уровнем чувствительности, широким охватом классов токсических соединений.

Традиционно, в качестве скринингового, в судебно-химических отделениях используется метод тонкослойной хроматографии (ТСХ). Однако, этот метод неспецифичен, требует затрат большого количества времени и реактивов, охватывает недостаточно широкий круг токсикологически значимых веществ.

Особую популярность в настоящее время приобретает систематический токсикологический анализ, проводимый методом газовой хроматографии с масс-селективным детектором (ГХ/МСД), так как он позволяет с высокой степенью надежности детектировать одновременно множество токсикологически значимых веществ в биообразцах. Несомненным его достоинством является наличие большой библиотеки лекарственных и наркотических препаратов и их метаболитов. Однако широкое применение этого метода ограничивается необходимостью использования дорогостоящего оборудования.

В специальной литературе (Кокорина Н.О., 2005) предлагается вариант скрининга лекарственных препаратов в биожидкостях методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Этот метод отличается простотой, небольшими трудозатратами, малым расходом реактивов. В настоящее время также создаются библиотеки лекарственных средств и наркотических веществ, которые можно дополнять самостоятельно.

В качестве примера приводим наш небольшой опыт работы в этой области. В 2011 году ГБУЗ Камчатского краевого БСМЭ, по программе модернизации здравоохранения, был приобретен хроматограф жидкостной микроколоночный «Альфахром» с базой данных «БД 2003». В комплект поставки входят: непосредственно база данных, включающая в себя хроматографические и спектральные параметры 500 УФ-поглощающих веществ на бумажном и электронном носителях; аттестованная смесь «БД-2003»; колонка, заполненная обращенно-фазовым сорбентом, тип «БД-2003»; концентрат элюента (4М раствор перхлората лития в 0,1М хлорной кислоте). Комплект предназначен для выполнения «Методики измерений массовой концентрации УФ-поглощающих веществ методом ВЭЖХ» №ФР.1.31.2003.00950. Методика аттестована в соответствии с ГОСТ Р 8.563-96 и ГОСТ 5725-2002 и регламентирует процедуру выполнения измерений массовой концентрации УФ-поглощающих веществ методом ВЭЖХ в обращенно-фазовом режиме с детектированием на 8 длинах волн. Режимные параметры хроматографа устанавливаются по аттестованной смеси «БД-2003». Идентификацию и определение содержания веществ проводят сравнением их хроматографических и спектральных параметров с аттестованными параметрами УФ-поглощающих веществ, включенных в базу. К несомненным преимуществам использования методики следует отнести:

1. возможность автоматической валидации хроматографической системы по тестовой смеси;
2. бесстандартная идентификация и количественное определение веществ, входящих в базу данных, в том числе наркотических средств и психотропных веществ, оборот которых в РФ запрещен (Список Ι): героин, МДА, МДМА, эфедрон, экгонин, каннабинол. А также наркотических средств и психотропных веществ, оборот которых в РФ ограничен (Списки ΙΙ и ΙΙΙ): морфин, кодеин, амфетамин. Это значительно расширяет возможности судебно-химического анализа при диагностике смертельных отравлений наркотическими средствами и психотропными веществами (Список Ι) и позволяет проводить исследования по определению наркотических средств и психотропных веществ в биологических объектах без получения учреждением лицензии на право работы с наркотическими средствами и психотропными веществами (Списки ΙΙ и ΙΙΙ).

Вместе с тем необходимо отметить, что использование методики применительно к извлечениям из биологических объектов имеет ряд особенностей:

• база данных позволяет четко идентифицировать нативные вещества и метаболиты, химическая структура которых не претерпевает значительных изменений;
• для подтверждения результатов идентификации необходимо проведение подтверждающего исследования альтернативными методами: ТСХ, ГЖХ с азотно-фосфорным детектором, УФ-спектрофотометрии.

Таким образом, практический алгоритм проведения химико-токсикологического анализа с использованием скрининга методом ВЭЖХ выглядит следующим образом:

• пробоподготовка методом жидкость-жидкостной экстракции;
• скрининг методом ВЭЖХ с использованием «Методики измерений массовой концентрации УФ-поглощающих веществ методом ВЭЖХ»;
• проведение ТСХ в частных системах растворителей со специфическими детектирующими реагентами;
• УФ-спектрофотометрия;
• газохроматографическое количественное определение с использованием азотно-фосфорного детектора методом внутреннего стандарта (дифениламин) при наличии стандартного образца сравнения в лаборатории.

Использование базы данных «БД-2003» при проведении скрининга методом ВЭЖХ позволило значительно сократить расход времени и реактивов на проведение исследований по определению наркотических средств и психотропных веществ, лекарственных препаратов в биологических объектах при одновременном расширении перечня определяемых веществ, значительном увеличении чувствительности (по сравнению с применяемым ранее методом ТСХ скрининга) и повышении качества проведения экспертного исследования.