Сравнительная характеристика методов изолирования и идентификации тианептина, пароксетина, венлафаксина

Publication in electronic media: 25.09.2012 under http://journal.forens-lit.ru/node/739
Publication in print media: Актуальные вопросы судебной медицины и экспертной практики, Барнаул-Новосибирск 2012 Вып. 18

г. Барнаул

В настоящее время в медицине достаточно широко применяют психотропные препараты различной химической структуры. Отравление ими происходит при передозировке, злоупотреблении, повышенной чувствительности организма к ним. По официальным данным, за последние годы постоянно увеличивается число лиц, употребляющих психотропные препараты. Поэтому, разработка методов идентификации лекарственных веществ антипсихотического действия в биологическом материале является актуальной.

Антидепрессанты являются одной из основных групп психотропных препаратов. Тианептин (коаксил) – антидепрессант из группы трициклических производных. По химической структуре тианептин является производным дибензотиадиазепина: 7-[(3-хлоро-6,1]дигидро-5,5-диоксо-6-метилдибензо-[c,f][1,2] тиазепин 11 –yl) амино] гептановая кислота, натриевая соль. Период полувыведения тианептина (Т½) -2,5 часа. 8 % препарата выводится через почки в неизмененном виде, основная же часть – в виде метаболитов. Тианептин выпускается в форме таблеток, покрытых оболочкой, по 12, 5 мг [Видаль, 2004].

Пароксетин (паксил) отличается по своему химическому строению от трициклических, тетрациклических и других известных антидепрессантов. Химическое название пароксетина: (2)(-)(3S, 4R)-4-(пара-фторфенил)-3-((3,4-метилендиокси) фенокси) метилпиперидин. С мочой в виде неизмененного пароксетина экскретируется менее 2 % от принятой дозы, тогда как экскреция метаболитов достигает 64 %. Пароксетин выпускается в форме таблеток, покрытых оболочкой, по 20 мг [Машковский М.Д., 2005].

Венлафаксин не принадлежит ни к одному классу антидепрессантов, по химической структуре является рацематом активных энантиомеров. Химическое название венлафаксина: 1-(2-(диметиламино)-1-(4-метокси-фенил) этил) циклогексанола гидрохлорид. Период полувыведения венлафаксина составляет 5 часов. Венлафаксин выпускается в форме таблеток по 37,5 мг и 75 мг.

Физико-химические свойства изучаемых препаратов в доступной нам литературе не приведены.

Принято считать, что антидепрессивная активность тианептина, пароксетина, венлафаксина и их эффективность при лечении психических расстройств обусловлена специфическим угнетением обратного захвата серотонина в нейронах головного мозга.

В клинических исследованиях у пациентов, принимающих тианептин и пароксетин, наблюдались нежелательные явления, связанные с суицидальными попытками и суицидальными мыслями [Люст Е.Н., Малкова Т.Л., 2011].

Британские исследователи обнаружили, что терапия венлафаксином ассоциируется с более высоким риском самоубийства, чем лечение тианептином, флуоксетином, ципрамилом, досулепином.

Целью нашего исследования явилось сравнение методов изолирования и идентификации этих препаратов в чистом виде и вытяжках из трупного материала. В доступной литературе не встретилось сведений о методах изолирования и идентификации пароксетина и венлафаксина. Тианептин изучался несколькими авторами [Кнауб Н.Н., Кудрикова Л.Е., Бирюков О.П., 2009; Люст Е.Н., Малкова Т.Л., 2011].

Экспериментальная часть

1.Изолирование тианептина, пароксетина и венлафаксина.

В ходе эксперимента исследовали искусственные смеси крови и печени с указанными препаратами. Для изучения влияния pH среды на степень извлечения тианептина, пароксетина и венлафаксина использовали буферные растворы со значением pH от 1,65 до 12,43 [Кнауб Н.Н., Кудрикова Л.Е., Бирюков О.П., 2009]. Установлено, что максимальное извлечение изучаемых препаратов достигается при pH водной фазы 9- 10.

Было проведено сравнительное изучение трех методов изолирования тианептина, пароксетина и венлафаксина: подкисленной водой по А.А. Васильевой [1975], ацетоном по В.А. Карташову (1988, 1990), методом жидкостно-жидкостной экстракции (боратный буфер рН 9,18) (Калетина Н.И., 2008) (табл. 1).

Таблица 1 Сравнительная оценка методов изолирования тианептина, пароксетина и венлафаксина

Из таблицы видно, что по методу А.А/ Васильевой. процент изолирования исследуемых препаратов примерно одинаков (16,5-22,5%). Методом В.А. Карташова процент изолирования пароксетина из биологического материала значительно выше (41,9%). Метод жидкостно-жидкостной экстракции наиболее эффективен для изолирования венлафаксина (34,7%).

2. Идентификация тианептина, пароксетина и венлафаксина.

Идентификацию исследуемых препаратов проводили методами ТСХ, спектрофотометрии в УФ-области, ВЭЖХ.

2.1. Для подтверждения подлинности исследованных препаратов использовали реакции окрашивания со следующими реактивами: концентрированной серной и азотной кислотами, Марки, Фреде, Манделина, Драгендорфа, йодплатинатным реактивом [Clarke's Isolation and identification of Drugs in Pharmaceuticals, Body fluids and Post-Mortem Material. London, 1986]. Результаты реакций окрашивания приведены в таблице 2.

Таблица 2 Реакции окрашивания паксила, коаксила и венлафаксина

Анализ результатов реакций окрашивания пароксетина, тианептина и венлафаксина с различными реактивами, свидетельствует о возможности их дифференциации при судебно- химическом исследовании.

2.2. Проводили исследование указанных препаратов в следующих системах растворителей: С1- бензол, С2- хлороформ- этанол- 25% аммиак (20: 5: 1), С3- бензол - диоксан- 25% аммиак (60:35:5), С4 - метанол- 25% аммиак (100:1,5), С5- этилацетат-метанол- 25% аммиак (85: 10:5), С6- хлороформ- ацетон (9:1). Результаты представлены в таблице 3.

Таблица 3 Значения Rf пароксетина, тианептина и венлафаксина в различных системах растворителей (С1- С6)

Из таблицы видно, что в системе растворителей С5 по значению Rf можно отличить пароксетин, тианептин, венлафаксин. В системах С3 и С6 можно отделить венлафаксин от тианептина и пароксетина.

2.3. Спектрофотометрия в УФ - области.

Идентификацию пароксетина, тианептина и венлафаксина методом спектрофотометрии проводили в УФ-области на СФ UV mini 1240 в области 200- 400 нм, растворитель- 0,1 н. раствор соляной кислоты. Для исследуемых препаратов экспериментальным путем был выведен удельный показатель поглощения Е1см1% (таблица 4) .

Таблица 4 Удельные показатели поглощения и УФ - максимумы пароксетина, тианептина, венлафаксина

То есть, спектрофотометрическое исследование позволяет дифференцировать исследуемые вещества и дает возможность количественного определения.

2.4. ВЭЖХ.

Исследование пароксетина, тианептина, венлафаксина проводили на жидкостном хроматографе марки «Милихром А-02» с УФ-детектором производства ЗАО «ЭкоНова» (Новосибирск). Использовали хроматографическую колонку «Prontosil 120 - 5 С18 Q» ( 2х 75 мм); температура колонки 35 град; элюент А -0,1% раствор трифторуксусной кислоты; элюент Б - 100% ацетонитрил; концентрация компонента Б изменялась от 0% до 100% с объемом 3000 мкл, 100% - 3800 мкл; скорость потока 150 мкл/ мин; объем вводимой пробы - 4 мкл. Детектирование осуществляли при длинах волн: 210, 220, 230, 240, 250, 260, 280, 300 нм. Идентифицировали вещества по объёмам удерживания и спектральным отношениям (таблица 5).

Таблица 5 Параметры удерживания и спектральные отношения тианептина, пароксетина и венлафаксина

Метод ВЭЖХ позволяет идентифицировать пароксетин, тианептин, венлафаксин по параметрам удерживания и спектральным отношениям.

Таким образом, подобраны оптимальные методы изолирования для тианептина, пароксетина и венлафаксина. Для определения исследуемых препаратов возможно применение ТСХ, УФ-спектрофотометрии и ВЭЖХ-исследования. Идентификация венлафаксина вызывает определённые сложности из-за особенностей его химического строения.

Список литературы

1. Швайкова М.Д. Токсикологическая химия.– М.,1975.- С. 124-131.
2. Карташов В.А. Изучение вопросов экстракции лекарственных веществ из биологического материала.– Барнаул, 1990.
3. Карташов В.А., Кнауб В.А., Чернова Л.В. Изолирование азотсодержащих органических оснований из ткани печени. Судебно - медицинская экспертиза. – 1988 г. № 4. – С. 31-33.
4. Машковский М.Д. Лекарственные средства. 15-е изд., перераб., испр., и доп.-М., ООО «Издательство Новая Волна», 2005. – 104 с.
5. Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России. АстраФармСервис.2004.– С. 691-693, 1415 с.
6. Clarke's Isolation and identification of Drugs in Pharmaceuticals, Body fluids and Post-Mortem Material. London 1986. – 154 с.
7. Калетина Н.И. Учебное пособие для ВУЗов. Токсикологическая химия. Метаболизм и анализ токсикантов. Издательская группа «ГЭОТАР-Медиа». 2008.– 225с.
8. Кнауб Н.Н., Кудрикова Л.Е., Бирюков О.П. Изолирование тианептина из биологических объектов при судебно-химическом исследовании.- Актуальные вопросы судебной медицины и экспертной практики. Новосибирск, 2009г. Выпуск 15.– С. 243-247.
9. Люст Е.Н., Малкова Т.Л. Токсикологическое значение тианептина и актуальность экспертного исследования с целью его обнаружения в биологическом материале.- Медицинская экспертиза и право. 2011г. № 5. – С. 10-12.