Полиморфизм rs2228314 гена SREBF2 в случаях внезапной сердечной смерти среди мужчин Новосибирска

Publication in electronic media: 02.02.2013 under http://journal.forens-lit.ru/node/818
Publication in print media: Актуальные вопросы судебной медицины и экспертной практики, Барнаул-Новосибирск 2012 Вып. 18

г. Новосибирск

По данным ВОЗ ведущее место среди причин смерти вне зависимости от уровня доходов населения занимает ишемическая болезнь сердца (WHO, 2011), основной морфологической причиной которой является атеросклеротическое поражение артериального русла (Никитин Ю.П. и др., 2005).

Ведущую роль в развитии атеросклеротического процесса играют нарушения липидного метаболизма (Красильникова и др., 2011). Так, наибольшей атерогенной фракцией липопротеинов считаются липопротеины низкой плотности, поскольку именно они наиболее интенсивно инфильтрируются в стенку кровеносных сосудов и окисляются, образуя окисленные ЛПНП. Поскольку окисленные частицы ЛПНП поглощаются макрофагами, их избыточное количество приводит к перерождению макрофагов в пенистые клетки, и это является первым этапом формирования атеросклеротической бляшки (Stocker R., 2004). К числу атерогенных эффектов окисленных ЛПНП относятся также: повреждение клеток эндотелия; повреждение гладкомышечных клеток; стимуляция моноцитов; подавление обратного транспорта макрофагов в кровеносное русло.

Риску внезапной смерти наиболее подвержены лица в возрастном интервале от 40 до 60 лет, преимущественно среди лиц мужского пола. По данным разных авторов, доля лиц мужского пола среди внезапно умерших колеблется от 68 до 98% (Блужас И. и др., 2003; Зяблов Ю.И. и др., 1999). Известно, что внезапная смерть может быть единственным, нередко первым и последним клиническим проявлением ишемической болезни сердца и других сердечно-сосудистых заболеваний (Курбанов Р.Д., 2002), поэтому выявление факторов риска данной патологии остается актуальным. Современная стратегия исследования включает в себя изучение генетической составляющей многофакторных заболеваний с поиском маркеров генов-кандидатов и оценкой их ассоциации с заболеванием.

Ведущие позиции в регуляции транскрипции генов липидного обмена, в первую очередь холестерина, занимают факторы семейства SREBР (sterol regulatory element-binding protein).

Внутриклеточное содержание холестерина контролируется по двум механизмам. Во-первых, связывание SREBP с регуляторными районами генов, кодирующих ферменты мевалонатного пути, координировано активирует транскрипцию этих генов (Jackson S.M. et al., 1995), что приводит к повышению концентрации холестерина в клетке. В свою очередь, повышение содержания холестерина подавляет активность стерол-регулируемых протеаз (Wang X. et al., 1994). В результате этого снижается скорость образования активной формы факторов SREBP из предшественников. Уменьшение содержания белков SREBP снижает активность генов мевалонатного пути и, тем самым, замедляет процесс образования холестерина (отрицательная обратная связь).

Второй механизм регуляции уровня холестерина связан с активацией под действием SREBP транскрипции гена, кодирующего рецептор ЛНП (Lloyd D.B. et al, 1995). Повышение количества этих рецепторов на поверхности клетки усиливает транспорт холестерина внутрь клетки. Тем самым снижается активность стерол-регулируемых протеаз, и, как следствие этого, уровень факторов SREBP. В свою очередь, это влечет за собой снижение транскрипционной активности гена рецептора ЛНП и нормализацию уровня холестерина.

Ген стерол-регулирующего элемент-связывающего транскрипционного фактора 2 (MIM 600481, SREBF2) расположен на длинном плече 22-й хромосомы (22q13). Однонуклеотидный полиморфизм (ОНП) rs2228314 – замена G на C в 1953-й нуклеотидной позиции приводит к замене G (Gly) на A (Ala) в 595-й аминокислотной позиции.

Целью данного исследования являлось изучение частот генотипов полиморфизма rs2228314 гена SREBF2 среди мужчин, умерших внезапной сердечной смертью.

Набор аутопсийного материала проводился у мужчин, умерших внезапно в возрасте 25–64 лет (жителей Октябрьского района г. Новосибирска), подвергнутых судебно-медицинскому исследованию. Средний возраст умерших составил 53,6±7,9 года. При секционном исследовании производился забор образцов ткани миокарда в количестве 5–10 г. Всего были проанализированы образцы ДНК 234 мужчин, умерших внезапно (без морфологических изменений, характерных для инфаркта миокарда, дилатационной и гипертрофической кардиомиопатий и др.).

Для выявления ассоциации анализируемых генотипов с внезапной смертью в качестве контроля были использованы данные популяционной выборки среди мужчин, подобранных по возрасту (246 человек), сформированной в рамках международного проекта «HAPIEE» (Health, Alcohol and Psychosocial factors In Eastern Europe).

ДНК выделяли из крови и тканей стандартным методом фенол-хлороформной экстракции. Полиморфизм rs2228314 гена SREBF2 детектировался с помощью ПЦР, праймеры SREBF2d 5’-agtgaccattaacaccttttgatac-3’ и SREBF2r 5’-cactggaagactttcttgagca-3’. Детекцию продуктов амплификации и рестрикции проводили методом электрофореза в 4 % полиакриламидном геле с последующим окрашиванием бромистым этидием. При наличии аллеля G детектировались три фрагмента длиной 116, 52 и 34 п. н.; при наличии аллеля C двух фрагментов – 86 и 116 п. н. Относительный риск заболевания по конкретному аллелю или генотипу вычисляли как отношение шансов.

Таблица 1. Частоты генотипов полиморфизма rs2228314 гена SREBF2 в исследуемых группах

В группе мужчин частоты генотипов полиморфизма rs2228314 гена SREBF2 находят-ся в равновесии Харди–Вайнберга (табл. 1). При сравнении частот генотипов rs2228314 гена SREBF2 в группе исследования с внезапной сердечной смертью (ВСС) и контрольной группе выявлено статистически значимое различие (р = 0,003). Отношение шансов обнаружить носителя генотипа СС в группе с внезапной сердечной смертью в 2,7 раза выше (95 % ДИ 1,2–6,2; р = 0,020), чем в контрольной группе. В контрольной группе частота носительства генотипа CG выше, чем в исследуемой группе с внезапной сердечной смертью, отношение шансов 1,8 (95 % ДИ 1,2–2,6; р = 0,005).
Таблица 2. Частоты генотипов полиморфизма rs2228314 гена SREBF2 в выборке с ВСС
в разных возрастных группах, %

При исследовании выборки внезапной сердечной смерти по возрастным группам (табл.2) выявлено, что генотип GG чаще встречается в возрастной группе до 50 лет по сравнению с группами старшего возраста, и, кроме того, в этой группе обнаружено сни-жение встречаемости гетерозиготного генотипа CG. Максимальные частоты носительства генотипа СС обнаружены в возрастном интервале 50–59 лет. Возможно, что эти возрастные отличия в частоте носительства разных генотипов отчасти отражают вклад этих генотипов в развитие феномена внезапной сердечной смерти.

Таким образом, обнаруженное увеличение встречаемости гомозиготного генотипа СС в группе исследования по сравнению с группой контроля, дает основание предполагать ассоциацию данного генотипа с повышенным риском внезапной сердечной смерти.