Изолирование дилтиазема из биоматериала и его идентификация

Publication in electronic media: 07.10.2011 under http://journal.forens-lit.ru/node/334
Publication in print media: Актуальные вопросы судебной медицины и права, Казань 2011 Вып. 2

Республиканское бюро судебно-медицинской экспертизы МЗ РТ

В отделение экспертизы трупов Набережночелнинского филиала РБСМЭ МЗ РТ поступил труп гражданки В., 1993 года рождения. Из направления о назначении судебно-медицинского исследования известно, что 30.12.2008 г., около 11 часов, у себя в квартире найден труп данной гражданки с признаками отравления. При судебно-медицинском исследовании трупа установлено наличие интенсивной, сине-фиолетовой окраски трупных пятен, одутловатости лица; жидкой, лаковой крови в полостях сердца и крупных сосудах; густых серых масс с таблетками серого цвета в желудке, полнокровие внутренних органов. Во время вскрытия от полостей и органов трупа посторонних запахов не ощущалось. На судебно-гистологическое исследование взяты кусочки головного мозга, легких, сердца, печени, почек. Для судебно-химического исследования взята кровь для определения этилового спирта; часть печени с желчным пузырем, почка, часть тонкого кишечника, головного мозга, желудок с содержимым для определения лекарственных, наркотических веществ. При судебно-гистологическом исследовании обнаружено полнокровие сосудов, экстравазаты в органах, очаговый отек легких, спазм бронхов, дистрофические изменения печени, почек, отек головного мозга, гетерогенный миокард. Из обстоятельства дела стало известно, что возможно было употребление лекарственного препарата, содержащее действующее вещество

(2S-cis)-3-(Acetyloxy)-5-[2-(dimethylamino)ethyl]-2,3–dihydro–2-(4–methoxyphenyl)-1,5–benzothiazepin–4-(5H)-one (дилтиазем C₂₂H₂₆N₂O₄S=414.5). Дилтиазем гидрохлорид − это белый порошок без запаха или мелкие кристаллы. Легко растворим в воде, хлороформе, метиленхлориде, муравьиной кислоте и метаноле; растворим в обезвоженном этаноле; практически нерастворим в эфире.

Фармакодинамика. Дилтиазем представляет собой селективный блокатор кальциевых каналов III класса, производное бензотиазепина. Оказывает антиангинальное, гипотензивное и антиаритмическое действие. Уменьшает сократимость миокарда, замедляет AV-проводимость, уменьшает ЧСС, снижает потребность миокарда в кислороде, расширяет коронарные артерии, увеличивает коронарный кровоток. Снижает тонус гладкой мускулатуры периферических артерий и ОПСС.

Фармакокинетика. После приема внутрь дилтиазем почти полностью абсорбируется из ЖКТ. Подвергается интенсивному метаболизму при "первом прохождении" через печень. Биодоступность составляет около 40%. Концентрация в плазме вариабельна. Связывание с белками плазмы составляет около 80%. Дилтиазем выделяется с грудным молоком. Дилтиазем плохо выводится при диализе. Интенсивно метаболизируется в печени при участии ферментной системы цитохрома P450. Один из метаболитов - десацетилдилтиазем - обладает 25-50% активностью неизмененного вещества. Второй метаболит - О-десметилдилтиазем. T1/2 дилтиазема составляет 3-5 ч. Выводится главным образом в виде метаболитов с желчью и мочой, приблизительно 2-4% выводится с мочой в неизменном виде. Форма выпуска: таблетки [1].

В доступной нам литературе мы не встречали данных о методах изолирования дилтиазема из биологического материала и его идентификации, поэтому судебно-химическое исследование проводилось экспериментальным путем.

Экспериментальная часть.

1. Для изолирования дилтиазема использовали таблетки «DILTIAZEM-TEVA» 30 мг. Пять таблеток растирали, смешивали с водой, извлекали смесью хлороформ-эфир (2:1) из кислой среды при рН≈2 и хлороформом из щелочной среды при рН≈9-10.
2. Исследование биологического материала. Изолирование из контрольной печени, затравленной таблетками «DILTIAZEM-TEVA» 30 мг: к 30,0 г печени добавляли 30 мг дилтиазема и оставляли на 24 часа. Для изолирования были использованы два метода: а) подкисленной водой; б) подкисленным спиртом по Стассу-Отто. Экстракцию проводили хлороформом при рН≈2 и рН≈9-10. Идентификацию проводили в извлечениях из щелочной среды. Для идентификации дилтиазема использовали физико-химические методы анализа: хроматографию в тонком слое сорбента, газовую хроматографию, спектрофотометрию в УФ- области спектра. Хроматографию в тонком слое сорбента проводили на пластинах «Сорбфил» ПТСХ-П-А-УФ в различных системах растворителей (табл.).

Таблица. Rf дилтиазема в различных системах растворителей.

При просматривании пластинок в УФ-свете при длинах волн 254 нм и 365 нм характерных флюоресцирующих пятен не наблюдали. Детектирование проводили реактивом: 1. Драгендорфа модифицированным по Мунье – наблюдали желтое окрашивание. 2. Смесью равных объёмов 1% растворов сульфата меди (II) и феррицианида калия – наблюдали слабое брусничное окрашивание.

С концентрированной серной кислотой; реактивом Марки; реактивом Фреде; 10% раствором хлорида окисного железа; 0,5% раствором феррицианида калия с добавлением 10% раствора хлорида окисного железа; реактивом Браттона-Маршала − образования окрашенных пятен не наблюдали.

Спектрофотометрию проводили после хроматографической очистки извлечения из щелочной среды с последующим элюированием на спектрофотометре СФ-56 методом сканирования длин волн в интервале 200-400 нм в кювете с толщиной слоя 1 см. В 0,02н растворе серной кислоты, в 96% этаноле, 0,1н растворе хлористоводородной кислоты, 0,1н гидроксида натрия наблюдали максимум поглощения при длине волны 235 нм.

Газохроматографию проводили на хроматографе «Кристаллюкс-4000» с детектором ионизационно-пламенным, на капиллярной колонке Витокап – Al-0,2; материал колонки − кварц алюминированный, фаза VS-1, иммобилизованная SE-54; длина колонки 25 м, диаметр 0,32 мм, толщина пленки фазы 0,2 мкм. Температура колонки − 240°С, испарителя − 250°С, детектора ПИД − 240°С. Расход азота: газ 1 – 25 см³/мин, газ 2 − 35 см³/мин, газ 3 − 35 см³/мин; водорода − 30 см³/мин, воздуха – 250 см³/мин. Время удерживания дилтиазема 36,15 минут.

Количественное определение дилтиазема проводили с использованием спектрофотометрии в среде 0,1 н хлористоводородной кислоты при длине волны 235 нм.

Изолирование дилтиазема из исследуемых биологических объектов. Из 25 г стенки желудка, печени проводили изолирование подкисленной водой с последующим извлечением из кислой и щелочных сред, как описано выше для контрольной печени.

Выводы:

1. При судебно-химическом исследовании дилтиазема целесообразно проводить изолирование биологического материала подкисленной водой с последующей идентификацией в извлечении при рН≈9-10.
2. Для идентификации дилтиазема следует применять комплекс физико-химических методов исследования, включающий хроматографию в тонком слое сорбента, спектрофотометрию, газожидкостную хроматографию, хромато-масс-спектрометрию.

Список литературы

1. Машковский М.Д. Лекарственные средства. − М., 1993. − 544 с.