Изолирование, идентификация, количественное определение тропикамида

Publication in electronic media: 08.10.2011 under http://journal.forens-lit.ru/node/340
Publication in print media: Актуальные вопросы судебной медицины и права, Казань 2011 Вып. 2

Республиканское бюро судебно-медицинской экспертизы МЗ РТ

Тропикамид – N-этил-aльфа-(гидроксиметил)- N-(4-пиридинметил)-бензенацетамид. Является действующим веществом препаратов: Tropicamid, Bistopamid, Diotrop, Mydral, Mydramide и др.

Тропикамид применяется в офтальмологии. Блокирует М-холинорецепторы сфинктера радужки и цилиарной мышцы, вызывая мидриаз и паралич аккомодации. Действие препарата наступает быстро, является относительно непродолжительным. При применении высоких доз препарата возможны повышение внутриглазного давления, приступ глаукомы, нарушение аккомодации, фотофобия. Возможны системные побочные эффекты: головная боль, психотические реакции, тахикардия, понижение АД, коллапс, гипертермия, аллергические реакции. Препарат выпускается в виде 0,5 %, 1 % растворов во флаконах-капельницах.

В последнее время тропикамид пользуется спросом у лиц, употребляющих наркотические вещества. По словам врачей-наркологов, тропикамид стал настоящим бедствием. В нашей практике были случаи идентификации этого «аптечного наркотика» при проведении судебно-химических экспертиз и исследований. Целью нашего исследования явилось изучение методов изолирования тропикамида из биологического материала, его идентификация и количественное определение.

Экспериментальная часть.

1. Изолирование тропикамида из 0,5 % глазных капель. Глазные капли извлекали из кислой среды при рН=2 эфиром и аммиачной среды при рН=6, рН=9 смесью хлороформ-изопропанол (9:1).
2. Исследование биологического материала. Исходя из физико-химических свойств тропикамида, для изолирования его из биологического материала были использованы три метода: а) модифицированный метод Васильевой при рН=6; б) модифицированный метод Васильевой при рН=9; в) солянокислый гидролиз с последующим извлечением из щелочной среды. Исследовали искусственную смесь мочи с тропикамидом. К 20 мл мочи добавляли 4 мл 0,5 % раствора тропикамида, оставляли на 24 часа, после чего изолировали вышеописанными методами. Во всех случаях экстракцию проводили из кислой среды при рН=2 эфиром и аммиачной среды рН=6, рН=9 смесью хлороформ-изопропанол (9:1).

   По модифицированному методу Васильевой из мочи при рН=9 выделено 90% тропикамида, при рН=6 выделено 95% тропикамида, после кислотного гидролиза с последующим извлечением из щелочной среды выделено 61% тропикамида от введенного количества. По литературным данным рекомендуется экстрагировать тропикамид хлороформом из нейтральной среды [3].

   По нашему мнению, при целенаправленном задании необходимо изолировать тропикамид хлороформом из нейтральной среды; в ходе общего исследования − из щелочной среды. Тропикамид из кислой среды извлекается незначительно: всего 3-7% от введенного количества.

3. Идентификация тропикамида проводилась с использованием физико-химических методов: хроматографии в тонком слое сорбента, высокоэффективной жидкостной хроматографии, газожидкостной хроматографии, хромато-масс-спектрометрии, УФ-спектрофотометрии. Количественное определение тропикамида в объектах проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Хроматография в тонком слое сорбента. Для хроматографии в тонком слое сорбента использовали пластинки "Сорбфил" ПТСХ-ПА и различные хроматографические системы. Детектирование проводили реактивом Драгендорфа, реактивом Либермана.

Наилучшее разделение в системе III.

Газожидкостная хроматография. Хроматограф «Кристаллюкс–4000М» с пламенно-ионизационным детектором, капиллярная кварцевая колонка, 30 м х 0,32 мм с нанесённой жидкой фазой ZB-5. Температура детектора 250°С, температура испарителя 250°С, температура колонки 240°С. Расходы газов-носителей: газ 1 – 20 см³/мин, газ 2 – 30 см³/мин, газ 3 – 50 см³/мин, воздух – 250 см³/мин, водород – 30 см³/мин. Время удерживания тропикамида 10,08 мин.

Хромато-масс-спектрометрия. Газовый хроматограф Agilent 6890 Series GC System с масс-селективным детектором HP 5973N. Колонка капиллярная кварцевая HP-5MS 100% Dimethylpolysiloxane 30 м х 0,25 мм х 0,5 мкм. Газ-носитель – гелий, деление потока 1:10, давление 60кПа. Температура колонки программируемая от 50°С до 280°С. Температура испарителя 240°С, температура интерфейса хроматограф – масс-селективный детектор 280°С, температура источника ионов масс-селективного детектора 150°С. Время удерживания тропикамида 14,46 мин. (основные ионы m/z = 92, 91, 65, 103, 93, 39, 163, 77).

УФ - спектрофотометрия. Снимали спектр поглощения растворов тропикамида на спектрофотометре НР 8453 фирмы «Хьюлетт-Паккард», наблюдали максимумы поглощения: в 1 н растворе соляной кислоты - 254 нм, в 1 н растворе гидроксида натрия - 256 нм, в 96° этиловом спирте - 257 нм.

Высокоэффективная жидкостная хроматография. Условия разделения: жидкостной хроматограф Agilent Technologies c диодно-матричным детектором 1200 Series. Колонка Zorbax SB C-18 4,0 х 250мм х 5мкм с предколонкой. Температура термостата колонки 30°. Скорость потока элюента 1 мл/мин. Подвижная фаза 0,01М раствор ацетата аммония: ацетонитрил (30:70). Длина волны 230нм. Объем вводимой пробы 20 мкл. Время выхода тропикамида − 8,9 минуты. Идентификацию тропикамида в исследуемых объектах проводили по времени удерживания и спектру поглощения.

В доступной литературе нет токсикологической оценки концентраций тропикамида. В нашей практике концентрации тропикамида составляют: от 0,21 мг/л до 0,64 мг/л в крови; от 0,06 мг/л до 15,9 мг/л – в моче. Правильная интерпретация найденных концентраций тропикамида представляет определенную трудность. По результатам наших исследований тропикамид применялся в разнообразных комбинациях: 1) тропикамид с морфином, героином, анальгином, кофеином; 2) тропикамид с фенобарбиталом, церукалом; 3) тропикамид с морфином. Во всех случаях в сочетании с этиловым спиртом. При исследовании жидкости из шприца, доставленного вместе с трупом, процентное содержание тропикамида составило 47,4%, морфина – 11,6%, кодеина – 8,9%, кофеина – 6,4% от общего состава жидкости.

Выводы

1. Тропикамид рекомендуется изолировать из биологического материала подкисленной водой по модифицированному методу Васильевой при рН=6, рН=9 и после кислотного гидролиза с последующим извлечением из щелочной среды при РН-9. Оба способа позволяют провести изолирование, идентификацию и количественное определение тропикамида при совместном присутствии с другими препаратами.
2. Для идентификации тропикамида следует применять комплекс физико-химических методов исследования, включающий хроматографию в тонком слое сорбента, газожидкостную хроматографию, спектрофотометрию в ультрафиолетовой области спектра, хромато-масс-спектрометрию, высокоэффективную жидкостную хроматографию.
3. Для количественного определения тропикамида использовать метод высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Список литературы

1. Справочник ВИДАЛЬ. Лекарственные препараты в России. – 1996.
2. A.C Moffat, M D.Osselton, B.Widdop// Clarke s Analysis of drugs and Poisons, London: Pharmaceutical Press.Electronic version, 2004.
3. Mueller, R. Klaus with authors from Germany, the U. S. A., Austria and the Netherland / R. Mueller// Toxicological Analisis, - Leipzig, 1995.