Этапы гистологического исследования тканей для верификации инородных частиц (протокол исследования)

Publication in electronic media: 04.10.2011 under http://journal.forens-lit.ru/node/322
Publication in print media: Актуальные вопросы судебной медицины и права, Казань 2011 Вып. 2

Республиканское бюро судебно-медицинской экспертизы МЗ РТ

При проведении гистологического исследования производится сопоставление морфофункциональных особенностей изучаемых органов с их нормальной структурой, знание о которых складывается в результате изучения структуры нормальных тканей с точки зрения множества научных дисциплин: анатомии, гистологии, цитологии, эмбриологии и пр. Вместе с тем есть ситуации, когда однозначный ответ о происхождении необычных находок, даже при доступности отлаженных информационных ресурсов, не может быть получен. С такой проблемой, например, мы столкнулись в конце 90-х, когда ощутили на себе последствия увеличения количества смертельных отравлений наркотическими веществами [1]. Мы стали обнаруживать инородные частицы в тканях внутренних органов и не всегда могли однозначно отличить их, например, от фибрина, чтобы сказать, что это и есть именно то, что мы ищем.

В специальной литературе встречаются публикации об обнаружении инородных частиц во внутренних органах трупов наркоманов [2, 3, 6, 7, 8]. Однако четких критериев, которые позволили бы верифицировать их, мы не обнаружили. Поэтому нами была разработана система обнаружения и верификации инородных частиц в тканях внутренних органов путем использования разных методов гистологического исследования. Эта система разрабатывалась применительно к инородным частицам, обнаруживаемым в случаях проведения судебно-медицинской экспертизы отравлений наркотическими веществами. Однако такой подход может быть применен к любому артефакту. В ходе исследования на практическом материале была проведена оценка возможностей гистологических методов исследования для выявления характерных особенностей частиц во внутренних органах и тканях [4, 5].

Определение характеристик инородных частиц проводилось методами исследования, представленными в таблице 1.

Таблица 1. Методы, использованные для определения характерных свойств инородных частиц в гистологических препаратах

Люминесцентное исследование, микроспектрофотометрия проводились на базе криминалистической лаборатории Средне-Волжского регионального центра судебных экспертиз при сотрудничестве с экспертом-криминалистом С.А.Никифоровым. Конфокальная микроскопия проводилась на базе представительства фирмы «Leica» (руководитель регионального представительства Д.А.Лавров) в центре коллективного пользования конфокальным лазерным сканирующим микроскопом при Российской Академии наук в сотрудничестве со старшим научным сотрудником Института биологии развития Л.П.Незлиным. Остальные виды исследования проводились на базе Республиканского бюро судебно-медицинской экспертизы МЗ РТ в судебно-гистологическом отделении при сотрудничестве с заведующим кафедрой электроэнергетических систем и сетей Казанского государственного энергетического университета д.ф.-м.н., профессором В.К.Козловым.

При проведении гистологического исследования использовались микроскоп Leica DME, поляфильтры ПФН-40,5, микроскопы Люмам И-2 и ЕС-ЛЮМАМ РП-011 со спектрофотометрическим устройством (МСФУ), лазерный микроанализатор ЛМА-10 со спектрографом PGS-2, микроскоп биологический Микмед-2, осветитель ОИ-9М (ГОСТ 15150-69), микрометр винтовой МОВ-1-15 (ГОСТ 7865-56), видеокамеры Nikon Eclipse E200 и Olimpus SP 350, графический редактор Adobe PhotoShop 7.0 и программное обеспечение Taucom на базе компьютера Celeron, конфокальный лазерный сканирующий микроскоп Leica TCS SPE с обработкой информации в программе LAS AF и ImageJ.

Частота обнаружения инородных частиц в стандартно изготовленных гистологических препаратах повышается с использованием фазово-контрастной и поляризационной микроскопии. Характерные свойства инородных частиц в биологическом материале позволяет установить последовательное применение дополнительных видов микроскопии и микроспектрофотометрии.

Для установления происхождения инородных частиц, обнаруженных в тканях внутренних органов при исследовании гистологических препаратов, нами рекомендуется следующая последовательность действий эксперта:

1. Предварительное исследование

1.1 Описать выявленную частицу в условиях стандартной окраски.

1.2 Подготовить образцы сравнения предполагаемой примеси (примесей) для гистологической обработки:

1.2.1 Плотные образцы предполагаемых примесей поместить непосредственно в подготавливаемый гистологический блок. Сыпучие образцы нуждаются в носителе, в качестве которых можно использовать фрагменты нейтрального биологического материала, оставшиеся после вырезки гистологических кусочков, поместив и сжав между ними эталон предполагаемой примеси.

1.2.2 Провести гистологическую проводку образцов сравнения, аналогичную использованной при подготовке исследуемых тканей, с последующей заливкой в парафин и изготовлением гистологических препаратов.

1.2.3 Изготовить гистологические препараты образцов сравнения, окрашенных тем же красителем, которыми были окрашены ткани.

1.2.4 Провести предварительный анализ частиц образца сравнения и верифицируемой частицы в гистологических препаратах на идентичность формы, структуры вещества, восприимчивости к красителю.

2. Дополнительное исследование

2.1 Дополнительно окрасить частицы образца сравнения и верифицируемой частицы специфическим красителем с последующим анализом на идентичность результатов гистохимической окраски.

2.2 Исследовать подготовленные образцы доступными методами микроскопии с анализом на идентичность результатов микроспектрофотометрии и различных видов микроскопии (фазово-контрастной, поляризационной, люминесцентной, конфокальной).

2.3 Провести микрофотографирование гистологических препаратов с анализом полученных изображений на предмет идентичности сравниваемого и исследуемого образцов с применением координат RGB.

3. Заключение

Идентичность достаточного количества характерных признаков, выявленных обычной и дополнительной микроскопией и окраской, позволяет сделать вывод об идентичности сравниваемого и исследуемого образцов и вынести заключение о происхождении обнаруженной инородной частицы.
Для получения информативных данных необходимо учитывать соблюдение правил изъятия, фиксации, проводки и окраски гистологического материала. В процессе исследования частиц необходимо сочетание обзорных гистологических методик и гистохимических методов исследований с применением специальных видов микроскопии. Следовательно, для изучения инородных частиц в тканях внутренних органов исследователю необходимы, кроме всего прочего, знания об их существовании, знания об их свойствах и владение методами обнаружения, выявления и оценки этих свойств.

Изучение инородных частиц на отдаленной приборной базе, включая использование конфокального микроскопа, микроспектрофотометрию и пр., целесообразно проводить путем накапливания материала для исследования, что позволяет сделать практика архивирования гистологических препаратов, даже в пределах рекомендованных сроков хранения. Поэтому предложенная технология по изучению инородных частиц доступна для гистологической лаборатории любой оснащенности.

Таким образом, обнаруженные при гистологическом исследовании частицы неясного происхождения становятся при таком подходе объектом для отдельного изучения. Предложенный метод изучения инородных частиц позволяет по-новому взглянуть на ставший привычным метод гистологического изучения тканей. Сравнение производится не с виртуальным образом объекта, а с вполне реальным образцом сравнения, как это и принято, например, при судебно-химических или медико-криминалистических видах исследования.

Список литературы

1. Александрова Л.Г., Петросянц Т.Г., Парамонов О.Г., Ширяк А.М. Судебно-медицинская экспертиза лиц, погибших после введения наркотических веществ // Судебно-медицинская экспертиза отравлений наркотическими веществами, психотропными веществами и алкоголем. Сборник научных работ по материалам Всероссийского совещания судебно-медицинских экспертов, наркологов и криминалистов с участием представителей правоохранительных органов. – Казань, 2001. – с. 63 – 67.
2. Богомолова И.Н. Перспективы исследования наркотических интоксикаций морфологическими методами / И.Н. Богомолова, Д.Ю. Шпехт // Актуальные вопросы судебной медицины и экспертной практики на современном этапе. Материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, посвященной 75-летию Российского центра судебно-медицинской экспертизы 17-20 октября 2006 года. – Москва, 2006. – с.141-143.
3. Морфологическая диагностика наркотических интоксикаций в судебной медицине / под ред. чл.-кор. Ю.И.Пиголкина. - М.: Медицина. 2004. – 304с.
4. Хромова А.М., Александрова Л.Г., Никифоров С.А., Каримова А.Р. О возможностях использования люминесцентной микроскопии инородных частиц при постмортальной судебно-медицинской диагностике острой и хронической наркотической интоксикации // Проблемы экспертизы в медицине. – Т 5 (июль-сентябрь). – 2005. - №3. - с. 29-30.
5. Хромова А.М., Спиридонов В.А., Александрова Л.Г. Использование лазерной конфокальной сканирующей микроскопии для выявления инородных частиц в тканях внутренних органов // Судебно-медицинская экспертиза. – 2010. – №1. - с. 34-36.
6. Cooper C. Cellulose Granuloma in the Lungs of a Cocaine Sniffer. C. B. Cooper, T. R. Bai, E. Heyderman, B. Corrin. – Br. Med. J. (Clin Res Ed). 1983. - Vol. 286(6383). –p. 2021–2022.
7. Hind C. Epidemiology and Non-Infective Complications / Hind C. // Thorax. – 1990. – Vol.45. – p. 891-898.
8. Lamb D. Starch and Talc Emboli in Drug Addicts' Lungs / Lamb D., Roberts G. // J. Clin. Pathol. - 1972 Vol.25. – N.10. – p. 876–881.