Перспективы применения иммуноферментного анализа в судебной биохимии

Publication in electronic media: 06.10.2011 under http://journal.forens-lit.ru/node/331
Publication in print media: Актуальные вопросы судебной медицины и права, Казань 2011 Вып. 2

ГБУЗ «Бюро судебно-медицинской экспертизы Департамента Здравоохранения Москвы»

В последние годы возросло значение биохимических исследований в судебно-медицинской практике.

Методы исследования судебной биохимии, к сожалению, ограничены спецификой биологического материала, исследуемого при проведении судебно-медицинской экспертизы, и сроками проведения экспертизы [3].

Комплекс биохимических исследований позволяет провести посмертную диагностику переохлаждения, сахарного диабета и состояния диабетической комы, указать на возможность почечно-печеночной недостаточности, состояние интоксикации, в том числе наркотической, асфиксию, краш-синдром, синдром позиционного сдавления, электротравму, отравление фосфорорганическими соединениями, метгемоглобинобразователями [1,4].

По последним данным, применение комплекса морфологических и биохимических методов можно использовать при проведении дифференциальной диагностики скоропостижной смерти от сердечно-сосудистых заболеваний [2].

Основными объектами исследования в судебной биохимии являются гемолизированная кровь, моча, ткани и органы трупов. Специфика исследуемого материала определила выбор методов, которые могут быть использованы для целей и задач судебной медицины.

Одним из перспективных методов биохимических исследований является иммуноферментный анализ (ИФА).

ИФА широко распространен в клинической практике и используется практически во всех сферах: акушерство и гинекология, вирусология, неонатология, ревматология, эндокринология и т.д. С помощью данного метода можно определить:

• Маркеры вирусных заболеваний;
• Маркеры инфекционных заболеваний;
• Онкомаркеры;
• Факторы гуморального и клеточного иммунитета;
• Гормоны щитовидной железы, гипофиза, коры надпочечников, плаценты.

Также ИФА позволяет обнаружить белки миелиновой оболочки нервных клеток (диагностика рассеянного склероза), провести диагностику туберкулеза, сифилиса, отдельных форм коллагенозов. Методом ИФА можно провести диагностику инфаркта миокарда на различных стадиях, выявить физиологическое и патологическое протекание беременности.

Для решения важных и актуальных задач судебно-медицинской практики также целесообразно применение метода иммуноферментного анализа.

Основные возможности ИФА в судебной медицине связаны со спецификой работы. Наибольшее значение имеет диагностика заболеваний, передающихся половым и парентеральным путем, а именно:

• Диагностика ВИЧ-инфекции;
• Диагностика вирусных заболеваний: маркеров гепатитов В,С,Д,Е.

С помощью ИФА можно выявлять наличие наркотических и лекарственных препаратов в биологических объектах, однако это является задачей химической службы.

Материалы и методы исследования.

Нами исследовано 24 случая на базе Бюро судебно-медицинской экспертизы Департамента Здравоохранения Москвы. Материал для исследования изымался в сроки до 24 часов после наступления смерти.

Исследуемые образцы трупной крови были условно разделены на 3 группы. В первую группу вошли 10 умерших, в анамнезе которых присутствовал диагноз ВИЧ. Вторая группа состояла из 8 умерших в возрасте 25−30 лет с подозрением на отравление наркотическими средствами. Третью (контрольную) группу составили 6 умерших в возрасте 80−90 лет, которых мы условно приняли неинфицированными ВИЧ.

Для выявления ВИЧ мы использовали иммуноферментную тест-систему для одновременного выявления антител к вирусу иммунодефицита человека первого и второго типов (ВИЧ-1 и ВИЧ-2) и антигена р24 и ВИЧ-1 производства ЗАО «Медико-биологический союз», Новосибирск.

Материальная база:

• ИФА-ридер УНИПЛАН;
• Термостатируемый шейкер-инкубатор ELMI;
• вошер WELLWASH;
• центрифуга Minispin plus.

Кровь центрифугировали в пробирках типа «эппендорф» на центрифуге Minispin plus при 5 тыс. оборотов в течение 10 мин, отбирали сыворотку и исследовали. Допускалось однократное замораживание сыворотки в морозильной камере бытового холодильника до 7 суток.

Иммуноферментное исследование производили согласно инструкции к тест-системе.

Результаты исследований.

В результате исследования были получены следующие результаты:

• в группе 1 в 10 образцах крови лиц, с подтвержденным диагнозом ВИЧ, были выявлены антитела к ВИЧ-1, и/или ВИЧ-2, и/или антиген р24 ВИЧ-1;
• в группе 2 в 5 случаях был отрицательный результат, в 3 случаях были выявлены антитела к ВИЧ-1, и/или ВИЧ-2, и/или антиген р24 ВИЧ-1;
• в группе 3 антитела к ВИЧ-1, и/или ВИЧ-2, и/или антиген р24 ВИЧ-1 выявлены не были.

Обсуждение результатов.

На основании проведенных исследований можно сделать предварительное заключение о допустимости исследования трупного материала и целесообразности применения метода ИФА для скрининга ВИЧ-инфекции в судебно-медицинской практике. Как показал наш опыт, при проведении ИФА гемолиз, хилезность сыворотки не влияют на диагностику ВИЧ.

В дальнейшем мы планируем увеличить выборку объектов для иммуноферментного исследования трупной крови на ВИЧ для проведения полного статистического анализа.

Кроме того, мы считаем целесообразным проводить скрининговое исследование трупного материала с целью выявления ВИЧ и вирусных гепатитов, передающихся парентеральным путем.

Список литературы

1. Асташкина О.Г. Исследование биохимических показателей трупного материала при наркотической интоксикации // Проблемы экспертизы в медицине. – 2004. − № 3. − С.15−17.
2. Асташкина О.Г., Власова Н.В. Значение и возможности судебно-биохимических исследований при дифференциальной диагностике различных видов патологических состояний // Проблемы экспертизы в медицине. – 2006. − № 4. − С.17−19.
3. Кинле А.Ф. Правила забора, хранения, доставки биоматериала для биохимического исследования и трактовки биохимических показателей в судебно-медицинской практике: Метод.рек. – Москва, 2002. – 35 с.
4. Павленко Е. Ю., Зимина Л. Н., Галанкина И. Е., Баринова М. В. Аспекты судебно-медицинской диагностики острых отравлений опиатами // Судебно-медицинская экспертиза. − 2003. − № 3. − С.10-14.