О новых и усовершенствованных медицинских технологиях в области экспертизы вещественных доказательств биологического происхождения

Publication in electronic media: 05.04.2013 under http://journal.forens-lit.ru/node/941
Publication in print media: Актуальные вопросы судебной медицины и медицинского права. Материалы научно-практической конференции с международным участием, посвященной памяти профессора В.О. Плаксина – Москва 2011

ФГУ Российский центр судебно-медицинской экспертизы Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, г. Москва

Подавляющее большинство новых и усовершенствованных медицинских технологий в области экспертизы вещественных доказательств биологического происхождения, созданных в последние годы, не вошло в практику работы судебно-биологических отделений региональных бюро судебно-медицинской экспертизы. Это обусловлено низкой информированностью экспертов и руководителей этих учреждений о результатах современных научных исследований в области судебной биологии и отсутствием эффективной системы контроля над их внедрением. Краткий обзор новых и усовершенствованных медицинских технологий, приведённый в данной статье, демонстрирует их возможности и указывает на необходимость внедрения в повседневную практику с целью расширения спектра решаемых экспертных задач.

Большая часть плановой научно-исследовательской работы, в области исследования вещественных доказательств биологического происхождения, в последнее десятилетие проводилась в Российском центре судебномедицинской экспертизы Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ФГУ РЦСМЭ Минздравсоцразвития России) и в Институте криминалистики Центра специальной техники ФСБ Российской Федерации (ИК ЦСТ ФСБ России). Итогом выполненной работы явился ряд оригинальных методов и усовершенствованных реакций, широкое внедрение которых в экспертную практику позволит значительно расширить возможности судебно-биологической экспертизы.

Приказом Минздравсоцразвития РФ от 31 декабря 2004 г. № 346 «Об организации выдачи разрешений на применение медицинских технологий» был предусмотрен новый порядок внедрения в практику результатов научных исследований. В соответствии с ним, результаты научных исследований, предназначенные для практического использования, были разделены две группы: новые медицинские технологии, впервые предлагаемые к использованию (в прошлом именовавшиеся методическими указаниями или рекомендациями) и усовершенствованные медицинские технологии (в прошлом пособия для врачей). К новым медицинским технологиям относятся впервые предлагаемые к использованию на территории РФ или усовершенствованные совокупности методов, средств, с помощью которых данные методы осуществляются, а в некоторых случаях и способ получения средства, применяемого в данной технологии.

В соответствии с приказом Минздрасоцразвития РФ от 20.07.2007 г. № 488 «Об утверждении административного регламента Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения и социального развития по исполнению государственной функции по выдаче разрешений на применение новых медицинских технологий», использование медицинских технологий разрешается только после получения регистрационных удостоверений, выдаваемых Федеральной службой по надзору в сфере здравоохранения и социального развития. Регистрационное удостоверение является документом, подтверждающим факт разрешения к применению на территории РФ. Зарегистрированная технология, как новая, так и усовершенствованная, вносится в Реестр медицинских технологий и наряду с другими требованиями и условиями является основанием для получения лицензии на медицинскую деятельность.

Всего, в последнее пятилетие, было зарегистрировано 20 новых и усовершенствованных медицинских технологий в области судебной биологии. Необходимо отметить, что 12 из них были подготовлены в государственном учреждении здравоохранения Московской области Бюро судебно-медицинской экспертизы на базе общеизвестных методов, используемых в повседневной практике производства судебно-биологических экспертиз и, в связи с этим, не представляют большого интереса:

1. «Установление наличия спермы с применением теста на простатоспецифический антиген человека «Seratec PSA Semiquant».
2. Установление видовой принадлежности крови и других объектов биологического происхождения реакцией кольцепреципитации в жидкой среде.
3. Установление видовой принадлежности крови и других объектов биологического происхождения методом встречного иммуноэлектрофореза на ацетатцеллюлозной пленке.
4. Установление наличия крови с помощью абсорбционной микроспектроскопии.
5. Установление видовой принадлежности крови и других объектов биологического происхождения методом преципитации в твердой среде (агаровом геле).
6. Установление наличия крови методом тонкослойной восходящей хроматографии.
7. Установление наличия крови с использованием диагностических тестполосок «Гемофан».
8. Установление наличия и видовой принадлежности крови с применением теста на гемоглобин человека «Seratec HemDirect».
9. Установление наличия слюны в следах на вещественных доказательствах по ее амилазной активности.
10. Установление наличия спермы в следах на вещественных доказательствах морфологическим методом».
11. Установление видовой принадлежности крови и других объектов биологического происхождения методом встречного иммуноэлектрофореза в агаре.
12. Установление наличия пота методом тонкослойной восходящей хроматографии в слое сорбента».

Настоящий интерес представляют 8 оригинальных технологий, созданных сотрудниками ФГУ РЦСМЭ Минздравсоцразвития и ИК ЦСТ ФСБ России.

Новая медицинская технология «Выявление антигена D системы Rh в следах крови» (Сахаров Р.С., Кондратова И.В., Федулова М.В., 2006), основана на применении в РАЭ модифицированных иммуноглобулинов резус-пептидов анти-D, приготовленных по оригинальной методике из поликлональных резус-антител анти-D и стандартных эритроцитов, обработанных высокоактивной протеазой.

Предыдущие варианты реакции абсорбции-элюции (РАЭ), предложенные в своё время для определения групповой принадлежности пятен крови по системе Rh, с использованием ферментных тестов ввиду своей сложности в настоящее время практически не используются.

Новая технология принципиально отличается от данных методик тем, что в РАЭ применяют не обычные поликлональные резус-антитела анти-D, а приготовленные из них пептиды анти-D, позволяющие осуществить специфическое выявление антигена D в пятнах крови.

Данная медицинская технология предназначена для выявления резусантигена D с помощью РАЭ в следах крови, не подвергшихся гнилостным изменениям, с предполагаемой давностью образования не более 6 месяцев.

Усовершенствованная медицинская технология «Выявление антигенов системы Rh в следах крови» (Сахаров Р.С., Кондратова И.В., 2006), заключается в применении в РАЭ резус-пептидов анти-D, сывороток анти-С, Cw, с, E, пригодных для выявления соответствующих антигенов в пятнах крови и стандартных эритроцитов, обработанных высокоактивной протеазой (протеазой-С или папаином). Данная технология по выявлению минорных (малых) антигенов системы Резус, позволяет определять полный резус-фенотип, что существенно расширяет возможности дифференцирования пятен крови на вещественных доказательствах при производстве судебно-биологических экспертиз. Давность образования исследуемых следов крови, хранившихся в условиях, близких к комнатным, не должна превышать 5 месяцев при выявлении антигена D и 3-4 месяцев при выявлении антигенов С, Cw, с, E,, что, в целом, является отражением протеиновой природы Rh-антигенов.

Новая медицинская технология «Выявление слабовыраженных антигенов системы АВО в следах крови, костной ткани и волосах человека» (Перепечина И.О., Юдина Г.С., 2007) основана на устранении побочного связывания антигенами костной ткани и волос иногруппных иммуноглобулинов. Авторами данной технологии предложены эффективные способы предварительной обработки объектов исследования и изогемагглютинирующих сывороток, повышающих их специфическую активность. Разработанные модификации учёта РАЭ значительно повышают чувствительность метода, что обеспечивает получение достоверных результатов при выявлении слабовыраженных антигенов системы АВО в объектах экспертизы. Это также способствует расширению количества пригодных для РАЭ изогемааглютинирующих сывороток из числа малоактивных и недостаточно специфичных для этой реакции.

Усовершенствованная медицинская технология «Установление наличия спермы по кислой фосфатазе методом электрофореза» (Ильина Е.А., 2007), основана на применении метода электрофореза в агарозном (агаровом) геле при щелочном (8,2-8,4) значении рН буферных растворов с последующим проявлением кислой фосфатазы субстратной смесью, специфичной для данного фермента. Диагностическим критерием происхождения кислой фосфатазы за счёт спермы является выявление зоны активности кислой фосфатазы с определённой электрофоретической подвижностью, занимающей на электрофореграмме площадь миграции от гемоглобина до альбумина. Методика позволяет получить положительные результаты при исследовании пятен спермы в случаях аспермии, олигоспермии, а также в пятнах спермы, смешанных с кровью. Возможность получения положительных результатов в пятнах, подвергнувшихся неблагоприятным физико-химическим воздействиям, снижается и зависит от качества и степени воздействия. Во избежание получения неспецифических результатов не рекомендуется проводить энзимографию на кислую фосфатазу в мазках из прямой кишки, поскольку насыщенные пятна могут обладать большой активностью щелочной фосфатазы, которая реагирует с фенолфталеинфосфатом натрия, так же, как и кислая фосфатаза.

Новая медицинская технология «Способ повышения эффективности определения групп системы АВО при судебно-медицинском исследовании следов, образованных микроколичеством выделений организма человека» (Перепечина И.О., Юдина Г.С., 2007), предлагает новые подходы для устранения связывания иногруппных антител антигенами следов выделений. Достаточно высокая эффективность выявления антигенов системы АВО в следах образованных микроколичеством выделений человека была достигнута за счёт повышения специфической активности изогеммаглютинирующих сывороток анти-А и анти-В, путём их адсорбции иногруппными антигенами слюны и энзимированными эритроцитами с одновременным использованием при учёте РАЭ энзимированных и нативных тест-эритроцитов в макромолекулярной среде. Применение данной технологии устраняет проблему побочного связывания антител с иногруппными антигенами следов выделений человека и способствует выявлению слабовыраженных антигенов.

Усовершенствованная медицинская технология «Определение антигенов системы АВО в РАЭ с помощью моноклональных антител в системе комплексного анализа микроследов слюны» (Лапенков М.И., Сахаров Р.С., Гуртовая С.В., Александрова В.Ю., Капинос Т.А., 2008), является модификацией классической реакции РАЭ, предназначенной для применения в системе комплексного анализа микроследов слюны и предполагает разделение биологического материала на составные части и раздельное выявление антигенов на клеточной поверхности и антигенов в жидкой части слюны.

Введены способы повышения специфичности реакции, а именно пробоподготовка надосадочной жидкости в виде ее прогревания на кипящей водяной бане с последующим скоростным центрифугированием, прогревание на кипящей водяной бане клеточного материала после его отмывания, добавление неионного детергента в раствор антител и отмывающий раствор. Методика разработана для работы с моноклональными антителами.

Усовершенствованная медицинская технология «Определение групповой принадлежности микрофрагментов волос с помощью реакции абсорбции-элюции с использованием моноклональных антител» (Лапенков М.И., Александрова В.Ю., Сахаров Р.С., Гуртовая С.В., Капинос Т.А., Смирнова В.К., 2009), позволяет выявлять АВН антигены во фрагментах стержней волос длиной не более 10-15 мм. Включает в себя методику пробоподготовки стержня волоса, подготовку специфического реагента на основе моноклональных антител, модификацию реакции абсорбцииэлюции с учетом биохимических и структурных особенностей стержня волоса. Благодаря высокой чувствительности реакции, эксперт, имея в наличии фрагмент волоса длиной 10-15 мм, имеет возможность проведения двукратного исследования с целью подтверждения результата.

Усовершенствованная медицинская технология «Определение антигенов системы АВО в следах крови с помощью РАЭ с использованием карточек «Скангель» (Лапенков М.И., Александрова В.Ю., Сахаров Р.С., Гуртовая С.В., Капинос Т.А., 2009), включает классическую РАЭ и гелевую технологию выявления агглютинатов с использованием карточек
«Скангель», что позволяет отказаться от микроскопической техники учета результатов реакции и оценивать наличие и выраженность ожидаемой агглютинации по степени прохождения эритроцитов и их агглютинатов через слой геля. Данная технология позволяет типировать пятна крови давностью до 4 лет и пятна крови, разведённой в 100 раз. Применение данного метода наиболее оптимально при поступлении на экспертизу большого количества серийных образцов, когда необходимо в короткие сроки провести групповую дифференциацию и выявить разногруппные пятна.

Новая медицинская технология определения антигенов АВН и Lewis с помощью иммуноферментного анализа в дот-варианте (М.И. Лапенков, В.Ю. Александрова, Р.С. Сахаров, С.В. Гуртовая, А.Е. Носырев, Е.А. Богатырёва, 2010),позволяет устанавливать категорию выделительства и групповую принадлежность по системе АВО у лиц, относящихся к категории «выделителей» групповых факторов. Метод пригоден для исследования следов выделений человека, содержащих гликопротеины слюну, сперму, влагалищные выделения и основан на способности нитроцеллюлозной мембраны связывать белки, в том числе растворимые групповые гликопротеины. Для исследования может отбираться только жидкая часть экстракта биологического материала, содержащая гликопротеины. Клеточный осадок обычно в анализе не используется и сохраняется для исследования другими методами, в первую очередь, молекулярно-генетическими.

Для освоения перечисленных медицинских технологий не требуется специального оборудования и дорогих расходных материалов, что должно способствовать их повсеместному внедрению в повседневную практику работы судебно-биологических отделений государственных судебноэкспертных учреждений Российской Федерации.