Вы здесь

Изолирование и идентификация ципрогептадина при судебно-химическом исследовании

Publication in electronic media: 12.11.2011 under http://journal.forens-lit.ru/node/488
Publication in print media: Актуальные вопросы судебной медицины и экспертной практики, Барнаул-Новосибирск 2011 Вып. 17

И.В. Стаценко, Н.А. Заздравных, Л.Г. Воронкова

г. Барнаул

Ципрогептадин – торговое название перитол – 4-(5-Дибензол(а, d) циклогептатриенилиден)-1- метилпиперидина гидрохлорид. Препарат обладает антигистаминной активностью, характеризуется также антихолинэстеразными свойствами (Машковский М.Д., 2005). Ципрогептадин оказывает выраженное седативное действие, способствует потенцированию наркотиков, обладает противорвотным и выраженным противовоспалительным действием. Препарат выпускается в таблетках по 4 мг, сироп (для детей) во флаконах по 100 мл (в 1 мл 0,4 мг препарата). Хранение: Список Б.

В последнее время ципрогептадин широко применяется в лечебной практике и поэтому представляет интерес для химико-токсикологического исследования. Нами была поставлена задача изучения изолирования и идентификации ципрогептадина из биологических объектов общепринятыми в судебной химии методами.

Ципрогептадин – белый с желтоватым оттенком кристаллический порошок. Растворимость: 1 часть препарата в 275 частей воды, 35 частях этанола, 16 частях хлороформа, 1,5 частях метанола. Не растворим в эфире.

Экспериментальная часть

В настоящее время для идентификации и количественного определения веществ широко используется метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), благодаря высокой чувствительности и специфичности. При изучении ципрогептадина мы использовали этот метод. Исследование спиртового раствора ципрогептадина проводили на микроколоночном жидкостном хроматографе «Милихром А-02» с УФ-детектором производства ЗАО «Эконова» (Новосибирск). Хроматограмма ципрогептадина представлена на рис. 1.


Рис. 1. Хроматограмма ципрогептадина.

Хроматографирование проводилось в следующих условиях: колонка «Prontosil 120-5 С18 Q» (2х75 мм), температура колонки 35 0С, элюент «А» - 0,1% раствор трифторуксусной кислоты, элюент «Б» - ацетонитрил. Градиент от 0% до 100% с объемом 3000 мкл, 100% – 3800 мкл, скорость потока 150 мкл/мин, объем вводимой пробы 4 мкл. Детектирование осуществлялось при следующих длинах волн: 210, 220, 230, 240, 250, 260, 280, 300нм. Обработка осуществлялась программой «Мультихром Спектр». Идентификацию проводили по времени удерживания, объему удерживания и спектральным отношениям относительно базовой длины волны 210 нм.

Из приведенной хроматограммы следует, что объем удерживания ципрогептадина составляет 1641 мкл/ мин, время удерживания 10,8 минут. Спектральные отношения пика с объемом удерживания 1641 составили соответственно: 220 нм – 1,363, 230 нм – 1,276, 240 нм – 0,913, 250 нм – 0,651, 260 нм – 0,301, 280 нм – 0,429, 300 нм – 0,354. Таким образом, метод ВЭЖХ позволяет надежно идентифицировать ципрогептадин по параметрам удерживания и спектральным отношениям.

Для подбора наиболее эффективного метода изолирования ципрогептадина была изучена его способность экстрагироваться в различных условиях (Информационное письмо, 1991). Изолирование ципрогептадина из водного раствора проводилось:

  1. хлороформом рН = 9, 10, 11
  2. этилацетатом при рН= 9, 10, 11
  3. после кислотного гидролиза при рН= 9, 10, 11 смесью хлороформ - н-бутанол (9:1)

Для количественного определения ципрогептадина нами был построен градуировочный график на ВЭЖХ из раствора очищенного высушенного ципрогептадина. Данные по проценту изолирования вышеуказанными методами представлены в табл. 1.

Таблица 1 Расчет процента изолирования ципрогептадина в зависимости от метода изолирования.

Изолирование Реакция среды рН Количество добавленного ципрогептадина, мг Выход в мг Выход в % Изолировано в среднем в %
Хлороформ 9,0 8,0 2,5 31,3 35
10,0 8,0 3,1 38,8
11,0 8,0 2,8 35,0
Этилацетат 9,0 8,0 7,1 88,8 91
10,0 8,0 7,5 93,8
11,0 8,0 7,25 90,6
Изолирование после кислотного гидролиза: хлороформ-н-бутанол 9,0 8,0 1,3 16,3 17,5
10,0 8,0 1,7 21,3
11,0 8,0 1,2 15,0

Анализируя данные таблицы можно сделать вывод о том, что наиболее эффективным методом изолирования является метод экстракции этилацетатом при рН = 10.

Для изучения изолирования ципрогептадина из биоматериала была приготовлена модельная смесь крови с препаратом. При этом рН среды доводилась боратным буфером (рН 10) и проводилась экстракция этилацетатом (жидкостно-жидкостная экстракция). Результаты приведены в табл. 2.

Таблица 2 Оценка примененного метода изолирования ципрогептадина из крови

Количество ципрогептадина, добавленное в кровь Обнаруженная концентрация в мг Процент извлечения от введенного количества, в % Метрологическая характеристика
0,001 0,00082 82 Х= 82,75 S= 2,5 Sх= 1,25 а= 3,98
0,003 0,0024 80
0,005 0,0043 86
0,007 0,0058 83

Х – среднее арифметическое, S – стандартное отклонение, Sх – стандартная ошибка, а – доверительный интервал. Граница доверительного интервала с надежностью 82,75% ± 3,98.

Для идентификации ципрогептадина использовались общепринятые цветные реакции (табл.3).

Таблица 3 Сравнительная характеристика реакций окрашивания ципрогептадина и алкалоидов опия

Наименование вещества Реактив Драгендорфа Реактив марки Йод-платинат Реактив Фреде Концентр. серная кислота
Ципрогептадин красно-оранжевое фиолетовое переходящее в серо-зеленое фиолетовое фиолет. переход. в бурое Фиолетовое
Морфин красно-оранжевое красно-фиолетовое темно-синее фиолет. нет окрашивания
Кодеин красно-оранжевое фиолетовое фиолетово-черное фиолет.-зеленое нет окрашивания

Проанализировав особенности реакций окрашивания ципрогептадина и алкалоидов опия с различными реактивами, можно сделать вывод об их схожести, что затрудняет дифференциацию этих веществ при судебно - химическом исследовании (Заздравных Н.А. с соавт., 2002).

ТСХ исследование Rf ципрогептадина и алкалоидов опия в следующих системах растворителей: С1-хлороформ, 96%, этанол, 25% раствор аммиака (20:5:1); С2 – хлороформ-ацетон (9:1), С3- этилацетат, метанол, 25% раствор аммиака (85:10:5), (табл. 4).

Таблица 4 Характеристика Rf в различных системах

Наименование вещества Системы растворителей
С1 (Rf) С2 (Rf) С3 (Rf)
ципрогептадин 0,81 0,22 0,65
Морфин 0,29 0,20 0,19
Кодеин 0,45 0,30 0,30

При повторном хроматографировании на «Милихроме А02» 4 мкл элюата ципрогептадина снимали УФ-спектр вещества, соответствующий указанному выше пику вблизи его максимума (рис.2).


Рис. 2 УФ-спектр поглощения ципрогептадина (спектральная кривая).

Ципрогептадин имеет выраженный максимум абсорбции при 222, 286 нм. Для установления удельного показателя поглощения был применен регистрирующий спектрофотометр «UVmini – 1240». Нами был установлен удельный показатель поглощения ципрогептадина Е1%1см, который составил в кислой среде при длине волны 286 нм - 433, в щелочной среде при длине волны 284 нм – 377.

В моче больной, принявшей внутрь 0,008 мг ципрогептадина, было изолировано этилацетатом при рН=10 (боратный буфер), идентифицировано и определено 0,001 мг% вещества.

Таким образом, из биологических жидкостей 90% ципрогептадина извлекается этилацетатом при рН = 10. Идентификация ТСХ и ВЭЖХ.

Список литературы

  1. Заздравных Н.А., Стаценко И.В., Воронкова Л.Г. Изучение возможности определения некоторых антигистаминных препаратов при судебно - химическом исследовании. //Вестник Межрегиональной Ассоциации «Здравоохранение Сибири». Новосибирск 2002г. стр. 73.
  2. Информационное письмо об определении морфина при судебно- химическом исследовании трупного материала. МЗ СССР. 1991г. стр. 7.
  3. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Пособие для врачей. Изд.15, 2005. 283с.

Яндекс.Метрика

Яндекс цитирования