Практические аспекты применения метода определения карбоксигемоглобина по суммарному спектру оксигемоглобина и карбоксигемоглобина

Publication in electronic media: 11.12.2011 under http://journal.forens-lit.ru/node/573
Publication in print media: Актуальные вопросы судебной медицины и экспертной практики, Новосибирск 2009 Вып. 15

Е. С. Стрельникова

г. Петропавловск-Камчатский

Количественное определение карбоксигемоглобина в крови в су-дебно-химических отделениях бюро судебно-медицинской экспертизы проводят, как правило, спектрофотометрически. Наиболее распространенным при этом является метод, предложенный Л. П. Букиной и Л. И. Ушаковой (1979 г). Метод использует определяемые заранее расчетные коэффициенты и исходит из модели двухкомпонентной системы: исходная — оксигемоглобин и карбоксигемоглобин; после восстановления дитионитом натрия — гемоглобин восстановленный и карбоксигемоглобин.

В литературе описано несколько способов определения концентрации карбоксигемоглобина, в том числе и в смеси с оксигемоглобином. Нас заинтересовал метод, предложенный Е. Я. Мирончиком (Кемеровское областное бюро судебно-медицинской экспертизы). Сущность метода заключается в следующем: кровь разводится 0,1% раствором аммиака до значений оптической плотности в максимумах 0,4 - 0,9 и снимаются электронные спектры поглощения на спектрофотометре в диапазоне длин волн от 500 до 590 нм в кюветах с ходом луча 10мм; раствор сравнения - 0,1% раствор аммиака. Расчет количественного содержания карбоксигемоглобина проводят следующим образом:

С%_HbCO = b*(Don/D575)-a

Значения коэффициентов а и b , определяются опытным путем: рассчитывают значения К для используемых длин волн (538; 568нм) следующим образом: К =100*(D538/D575 — 1). Зависимость концентрации карбоксигемоглобина от К описывается линейным уравнением С%_HbCO = b*К + а. Снимали спектры и расчитывали значения К для растворов крови без карбоксигемоглобина и после насыщения этих растворов оксидом углерода (11), но без добавления дитионита натрия.

Предложенный метод был изучен, апробирован на модельных смесях из растворов с 0 и 100% концентрацией карбоксигемоглобина и внедрен в экспертную практику. Для расчета количественного содержания карбоксигемоглобина использовали оптическую плотность при 538 нм (а=384,4; b=415,6) и при 568 нм (а=157,8; Ь=222,0). Результат представляется как среднее значение из двух определений.

За прошедший период выполнено 35 исследований экспертного материала. Во всех случаях параллельно исследовалась контрольная проба крови. Кроме того, для качественного доказательства карбоксиге-моглобина используются дополнительные методы — цветные реакции и газовую хроматографию. При этом несовпадение концентраций карбоксигемоглобина при 538 и 568 нм более чем на 10% наблюдалась в 3 случаях. В среднем, разница концентраций карбоксигемоглобина при двух длинах волн составила 3,86%. При исследовании контрольных образцов крови концентрация карбоксигемоглобина составила в среднем 8,3%.

Таким образом, предложенный метод определения карбоксигемоглобина по суммарному спектру оксигемоглобина и карбоксигемоглобина повышает достоверность и точность количественного определения (усредненный результат двух определений), прост в исполнении (не требует использования дорогостоящих реактивов) и сокращает расход времени на проведение судебно-химического исследования.