Практическое использование прибора SeraQuant для выявления гемоглобина человека при исследовании судебно-биологических объектов

Publication in electronic media: 25.10.2011 under http://journal.forens-lit.ru/node/409
Publication in print media: Актуальные вопросы судебной медицины и экспертной практики, Новосибирск 2009 Вып. 15

Н. Н. Михайлова, Н. Р. Вдовина, О. М. Зороастров

г. Тюмень

В работе судебно-медицинских экспертов-биологов при исследовании вещественных доказательств значительную часть времени занимает проведение различных поисковых реакций, большинство которых составляют методики обнаружения наличия крови. При установлении наличия крови в следах применяют микроспектроскопию, хроматографию в тонком слое сорбента, микролюминисценцию, иммунохроматографию на плашках. При выявлении крови в практически невидимых или ничтожно малых следах возникает вопрос о выборе метода установления вида крови. По данным СВ.Гуртовой и Л.Н. Тылецкой (1992) вид крови устанавливался только методом встречного иммуноэлектрофореза на мембранах из ацетата-целлюлозы, но в ряде случаев и этим высокочувствительным методом определить вид белка не удавалось.

Нередко в таких ситуациях в выводах указывалось, что обнаружена кровь, видовую принадлежность которой не удалось установить в связи с небольшим количеством материала. В этом случае уместно использование тест-кассет SERATEC HemDirect и прибора SeraQuant.

В нашем случае экспертной практики, где объектом исследования являлся мясной фарш (пельмени), наличие крови методом тонкослойной хроматографии не проводилось, а весь материал сразу проверяли на определение видовой принадлежности белка методом иммуноэлектрофореза в солевом агаре.

В прокуратуру обратилась гражданка с заявлением о том, что купленные пельмени имеют странный сладковатый вкус. У потерпевшей было изъято 25 штук пельменей. Из каждого пельменя были сделаны вытяжки. Далее вытяжки разводили под контролем пробы Геллера до приблизительной концентрации в них белка 1:1000. В качестве контроля брали фарш куриный, свиной, говяжий, «смешанный» фарш, а также физиологический раствор, которым производили экстрагирование и кровь человека. Для проверки «чистоты опыта» все представленные в качестве контроля виды фарша смешивали с ничтожно малым количеством крови человека.

Были использованы два метода определения видовой принадлежности крови: метод встречного иммуноэлектрофореза и по Оухтерлони.

В результате иммуноэлектрофореза и реакции Оухтерлони получены полосы преципитации:

• в части вытяжек из фарша пельменей были обнаружены белки крови человека, птицы, рогатого скота и свиньи.
• в остальных вытяжках из фарша были обнаружены белки крови свиньи, рогатого скота и птицы.
• контроли «чистого» и «смешанного» фарша, введенные в реакцию, сработали соответствующим образом.
• в вытяжках из фарша с добавлением крови человека наряду с соответствующими белками животных выявили и белок человека.

Вытяжки из фарша, в которых был обнаружен белок человека, и еще две произвольно взятые вытяжки были проверены на приборе SeraQuant. В трех из них был получен положительный результат с содержанием гемоглобина человека 5,48±2,1; 13,93±8,9; 27,12±14,9 соответственно, в четвертой вытяжке гемоглобина человека не было, на что указывал результат

Затем нами были исследованы другие пачки пельменей, хинкали и мантов из того же магазина, с маркировкой того же производителя, которая была на пачке купленной потерпевшей. Из каждой пачки нами произвольно выбраны по 10 образцов. Видовую принадлежность определяли методом встречного иммуноэлектрофореза. В результате реакции были обнаружены белки крови свиньи, рогатого скота и птицы. Белок человека традиционными методами не найден.

Шесть произвольно взятых образцов проверяли иммунохроматографическим методом.

В результате измерения обнаружено:

— в четырех пельменях количество Нб менее 4,5 ng/ml- что указывает на отрицательный результат.

— в двух пельменях количество Нб более 50,0 ng/ml и 206,78 — что указывает на положительный результат.

В контрольных опытах неспецифических результатов не получено.

Таким образом, полученные результаты указывают на высокую чувствительность иммунохроматографического метода с применением прибора SeraQuant, позволяющего не только установить присутствие крови человека, но и определить ее количественное содержание. Тогда как рутинные методики исследования не всегда позволяют выявить кровь человека.

Использование прибора в этом случае исключило один из существенных недостатков методики - с течением времени (по данным нашей лаборатории), при отрицательном первоначальном результате, наравне с полосой контроля появляется полоса, свидетельствующая о положительном результате. Следовательно, мы наблюдаем расхождение между тем, что было описано первоначально и при вторичной регистрации результата.

Чувствительность прибора позволила выявить минимальное количество гемоглобина человека, которое не выявилось рутинными методиками.