Химико-токсикологическое исследование β-адреноблокаторов

Publication in electronic media: 08.08.2010 under http://journal.forens-lit.ru/node/187
Publication in print media: Актуальные вопросы судебной медицины и экспертной практики, Новосибирск 2009 Вып. 15

Н. О. Кокорина

г. Новосибирск

В 1964 г. синтезирован первый β-блокатор — пропранолол, кото­рый и является прототипом всех существующих β-блокаторов. Известно уже более 100 лекарственных препаратов, обладающих β-блокирующими свойствами и многие из них нашли широкое применение в лечебной практике. Наиболее часто применяются атенолол, метопролол, бисопролол - β-адреноблокаторы избирательного действия (кардиоселективные) и пропранолол - β-адреноблокатор неизбирательного действия (действу­ет как на β-, так и на β-2 адренорецепторы). В практике судебной химии известно немало случаев отравлений этими лекарственными препарата­ми, однако в литературе не достаточно описаны методы изолирования и определения их из биологических объектов.

АНАПРИЛИН (Anaprilin). Активное действующее вещество Пропранолол.

Синонимы: Индерал, Обзидан, Пропранолол, Стобетин, Аlindol, Angilol, Antarol, Avlocardil, Bedranol, Betadren, Bricoran, Cardinol, Caridorol, Dederal, Deralin, Dociton, Elanol, Eliblok, Inderal, Inderex, Naprilin, Noloten, Obsidan, Opranol, Propanur, Propral, Propranolol hydrochloride, Pylapron, Sloprolol, Stobetin, Tenomal, Tiperal и др). Химическое название: 1 -[(1 -метилэтил)амино]-3-( 1 -нафталенилокси)-2-пропанол (и в виде гидрохлорида). Брутто-формула: C₁₆H₂₁NO₂. Пропранолола гидрохлорид белый кристаллический порошок, хорошо растворим в воде и этиловом спирте. Биодоступность 3-40%. Связывание с белка­ми 90-95%. В печени связывается с глюкуранидами, выводится почками в неизменном виде около 1%, период полувыведения T½ 2-5 часов.

АТЕНОЛОЛ (Atenolol). Активное действующее вещество Атенолол.

Синонимы: Ормидол, Принорм, Atenol, Betacard, Blokium, Catenol, Catenolol, Hipoten, Myocord, Normiten, Ormidol, Prenormil, Prinorm, Telvodin, Tenoblock, Tenolol, Tenormin, Tensicor, Velorin, Vericordin и др). Химическое название: 4-[2-гидрокси-3[(1-метилэтил)амино]проп окси]бензолацетамид (и в виде моногидрохлорида). Брутто-формула C₁₄H₂₂N₂O₃. Атенолола моногидрохлорид, белый кристаллический порошок, растворим в воде (26,5 мг/мл), в 0,1 М растворе соляной кисло­ты (300 мг/мл), хлороформе 3 мг/мл. Биодоступность 50%. Связывание с белками плазмы 6-16%. Атенолол практически не метаболизирует в печени, выводится почками 85%, период полувыведения T½ 6-7 часов.

БИСОПРОЛОЛ (Bisoprolol). Активное вещество Бисопролол.

Синонимы: Арител, Бипрол, Бисогамма, Бисокард, Бисопролола гемифурмат, Бисопролола фурмат, исопронкор, Конкор, Конкор Кор, Корбис, Кординорм, Коронал и др.). Химическое название: 1-[4-[[2-(1-метилэтокси)этокси]метил]фенокси]-3-[(метилэтил)амино]-2-прорпнол (и в виде фумарата). Брутто-формула: C₁₈H₃₁NO₄. Бисопролола фумарат белый кристаллический порошок, хорошо растворим в воде, метиловом спир­те, этиловом спирте, хлороформе. Биодоступность 90%. Связывание с белками плазмы 30-35%. Бисопролол метаболизирует в печени с обра­зованием неактивных метаболитов, выводится почками в неизменном виде около 50%, период полувыведения T½ 10-12 часов.

МЕТОПРОЛОЛ (Metoprolol). Активное действующее вещество Метопролол.

Синонимы: Беталок, Блокеан, Спесикор, Beloc, Betaloc, Blocksan, Lopressor, Veobloc, Opresol, Selopral, Spesicor и др.). Химическое назва­ние: (+)-1-[4-(2-метоксиметил)фенокси]-3-[(1метил)амино]-2-пропанол (в виде тартрата или сукцината). Брутто-формула: C₁₅H₂₅NO₂. Метопролола тартрат белый, практически без запаха порошок, хорошо раство­рим в воде, этиловом спирте, хлороформе, слабо растворим в ацетоне, не растворим в эфире, метаноле, дихлорметане, этилацетате, гептане. Метопрлола сукцинат белый кристаллический порошок, хорошо рас­творим в воде, умеренно растворим в этиловом спирте, слабо растворим в дихлорметане, практически не растворим в ацетоне, эфире, этилаце­тате, гептане. Биодоступность 50-70%. Связывание с белками плазмы 10-12%. Метопролол метаболизирует в печени с образованием двух ак­тивных метаболитов, обладающих β-адреноблокирующей активностью, выводится почками в виде метаболитов 90-95%, в неизменном виде 5-10%, период полувыведения T½ 3-5 часов.

Опытным путем установлено, что лучшими растворителями для исследуемых β-адреноблокаторов являются хлороформ, ацетон и метиленхлорид.

Приготовлена модельная смесь мочи с атенололом, бисопрололом, метопрололом и пропранололом с концентрациями, соответствующими токсическим дозам. Проведены исследования по влиянию рН среды на степень извлечения хлороформом β адреноблокаторов (табл. 1).

Таблица 1

Влияние рН среды на степень экстракции β адреноблокаторов

Из полученных результатов видно, что на степень извлечения би­сопролола, метопролола, пропранолола рН среды оказывает незначи­тельное влияние, тогда, как при рН более 9, степень извлечения атеноло­ла повышается в 2 раза. Установлено, что при рН

Для выбора условий идентификации и разделения исследуемых β- адреноблокаторов методом хроматографирования в тонком слое сорбен­та на пластинках «Сорбфил ПТСХ-А-УФ»ТСХ опробованы несколько систем растворителей (табл. 2).

1. эфир:ацетон:25% аммиак=40:20:1
2. толуол:изопропиловый спирт:25% аммиак=5:4:1
3. толуол:этанол:диэтиламин=9:1:1
4. хлороформ:ацетон=9:1
5. хлороформ:метанол=8,5:1,5
6. н-бутанол:этанол:25% аммиак=5:1:5
7. этилацетат:ацетон:25% аммиак=50:45:5
8. бензол:диоксан:25% аммиак=60:35:5
9. н-бутанол:уксусная кислота конц.:вода=4:1:1.

Значения Rf β-адреноблокаторов в различных системах растворителей

Таблица 2

Системы растворителей

Пластинки проявляли:
1) реактивом Драгендорфа,
2) H₂SO₄ конц.,
3) НNO₃ конц.,
4) реактивом Манделина,
5) реактивом Либермана,
6) реактивом Фреде,
7) реактивом Марки,
8) 5% раствором FeCL₃,
9) 0,3 М раствором CuSO₄, подкисленным H₂SO₄, затем 0,3 М раствор KI,
10) 2% раствор КМnО₄ (табл. 3).

Таблица 3

Цветные реакции идентификации β-адреноблокаторов

Как видно из представленных данных, ни в одной из систем рас­творителей не удалось разделить метопролол и бисопролол, однако их можно дифференцировать по проявлению реактивами Манделина и Ли­бермана, в которых бисопролол дает пятно малинового цвета, метопро­лол проявляется со временем пятном сиреневого цвета.

Исследуемые β-адреноблокаторы хорошо идентифицируются ме­тодом ВЭЖХ на высокоэффективном микроколоночном жидкостном хроматографе «Милихром А-02» с УФ-детектором на обращеннофазовой колонке с сорбентом Nucleosil C18 в градиентном режиме: элюент В (ацетонитрил) от 2 до 100% за 3000 мкл, элюент А — 0,1% раствор трифторуксусной кислоты в дистиллированной воде. Длины волн — 210, 220, 230, 240, 250, 260, 280, 300 нм, базовая длина волны 210 нм. Идентификация β-адреноблокаторов проводилась по времени удержи­вания (объему удерживания) и спектральным отношениям. Построены калибровочные графики для количественного определения.

Выводы

1. В результате проведенных исследований определены наилуч­шие растворители для извлечения β-адреноблокаторов (ате­нолол, бисопролол, метапролол, пропранолол) — хлороформ, ацетон, метиленхлорид.
2. Определено, что степень извлечения бисопролола, метопролола, пропранолола при рН 8-11 меняется незначительно, тогда, как при рН > 9, степень извлечения атенолола возрастает. При рН
3. Для исследования методом ТСХ подобраны системы раствори­телей и проявители, определены значения Rf.
4. Для исследования методом ВЭЖХ определены хроматографические параметры: время удерживания (объем удерживания), спектральные отношения, построены калибровочные графики для количественного определения атенолола, бисопролола, метопролола, пропранолола.