Определение флуоксетина в биологических объектах

Publication in electronic media: 08.08.2010 under http://journal.forens-lit.ru/node/186
Publication in print media: Актуальные вопросы судебной медицины и экспертной практики, Новосибирск 2009 Вып. 15

Н. Н. Кнауб, В. А. Кнауб, Д. Д. Даутова

г. Барнаул

Флуоксетин (Прозак, Профлузак, Флоксэт, Флувал и др.) являет­ся селективным ингибитором обратного захвата серотонина, широко используется для лечения депрессий различной этиологии (Пантелее­ва Г. П., 2000, Hyttel J., 1990).

Флуоксетин, как и другие антидепрессанты этой группы, обладает побочными эффектами, которые проявляются развитием желудочно-ки­шечных расстройств, появлением психомоторного возбуждения, усиле­нием суицидальных тенденций, маниакальными вспышками, нарушением сознания от делирия до сопора и комы с последующим летальным исходом (Пантелеева Г.П., 2002).

Флуоксетин — (±)-N-метил-3-фенил-3-(пара-трифторметил) феноксипропиламина гидрохлорид, представляет собой белый кристалли­ческий порошок, хорошо растворимый в метаноле, этаноле, ацетонитриле, хлороформе и ацетоне, растворимый в этилацетате, дихлорэтане, воде (14 г/л), нерастворимый в толуоле, циклогексане, гексане.

В литературе описаны смертельные случаи отравления флуоксетином в комбинации с алкоголем, мапротилином; кодеином, темазепамом (Пантелеева Г. П., 2002, Kincaid R. L., 1990). Однако в судебно-химическом отношении флуоксетин изучен недостаточно. В связи с этим разработка методик определения данного препарата в биологических объектах является весьма актуальной.

Целью нашего исследования является изучение возможности оп­ределения флуоксетина в биологических объектах.

Материалы и методы исследования

Исследование проводили на модельных образцах ткани печени и на экспериментальных лабораторных животных. Изолирование флуок­сетина из биологических объектов осуществляли нейтральным ацето­ном по методу, разработанному В.А. Карташовым (1988).

Для идентификации флуоксетина, выделенного из биологическо­го материала, применяли метод газожидкостной хроматографии с масс-сел ективным детектированием (ГЖХ МС). Определение проводили с помощью газового хроматографа Angilent Technologies 6890N Network GC System с масс-селективным детектором модели 5973 в режиме ио­низации электронным ударом (70 эВ), с автоматическим жидкостным дозатором модели 7683 В Series. Хроматографический анализ осущест­вляли при следующих условиях: колонка — кварцевая капиллярная НР-5MS (30 м х 0,252 мм, толщина пленки фазы — 0,25 мкм); температура инжектора 280°С, интерфейс детектора — 310°С; начальная и конечная температура термостата колонки — 50 и 280°С соответственно, темпе­ратура термостата колонки изменялась со скоростью 10 град/мин; газ-носитель — гелий; деление потока 1:40; объем вводимой пробы — 1 мкл. В качестве стандартного образца использовали спиртовый раствор флуоксетина 100 мг/мл и 10 мг/мл.

Регистрацию масс-спектров проводили в режиме по полному ион­ному току. Полученные масс-спектры сравнивали с библиотечной базой данных. Анализировали идентифицированные пики веществ с процен­том вероятности не менее 70.

Количественное определение флуоксетина также проводили га-зохроматографическим методом. Для этого использовали хроматог­раф «Кристалл 5000.1» с детектором по ионизации пламени. Усло­вия хроматографирования: колонка кварцевая капиллярная HP-5MS (30 м х 0,25 мм, толщина пленки фазы — 0,25 мкм); температура инжек­тора 290°С, детектора — 290°С; температура колонки 120°С с дальней­шим повышением до 260°С со скоростью 15°С за 1 мин; газ-носитель — гелий; деление потока 1:40; объем вводимой пробы — 1 мкл.

Для построения калибровочного графика использовали спиртовые растворы флуоксетина 50, 100 и 150 мкг/мл. Уравнение регрессии рас­считывали методом наименьших квадратов. Метрологические характе­ристики метода количественного определения приведены в таблице 1.

Таблица 1

Количественное определение флуоксетина методом ГЖХ

Полученные результаты позволили получить уравнение регрес­сии следующего вида: Y = 1.056 *Х + 7.22, коэффициент корреляции составил 0,986.

Результаты исследования и их обсуждение

Газохроматографическое определение флуоксетина проводили после изолирования его из биологического материала нейтральным аце­тоном. Эксперимент проводили на модельных образцах ткани печени. В результате проведенных исследований было установлено, что в среднем из ткани печени нейтральным ацетоном извлекается около 31% флуок­сетина.

Разработанные методики определения флуоксетина в биологичес­ких объектах были апробированы в эксперименте на лабораторном жи­вотном (крыса). Белой лабораторной крысе перорально вводили водную суспензию флуоксетина из расчета 0,6 мг на г массы животного. Изоли­рование флуоксетина из внутренних органов (стенка желудка, печень, почка) проводили нейтральным ацетоном.

Идентифицировали флуоксетин в полученных извлечениях мето­дом ГЖХ МС в условиях, описанных ранее. Результаты идентификации представлены на рис. 1,2.

Рис. 1 Результаты идентификации флуоксетина методом ГЖХ-МС

Как видно из представленной хроматограммы, время удержива­ния флуоксетина составило 7,004 мин. Полученный масс-спектр вещества, выделенного из биологического материала, полностью идентичен масс-спектру флуоксетина (по данным электронной библиотеки масс-спектров).

Рис. 2 Масс-спектр флуоксетина

Результаты количественного определения флуоксетина, изолиро­ванного из внутренних органов экспериментального животного, ней­тральным ацетоном приведены в таблице 2.

Таблица 2

Содержание флуоксетина во внутренних органах экспериментального животного

Из представленных данных следует, что максимальное количес­тво флуоксетина обнаружено в стенке желудка и составило 22,5 мг%, минимальное количество — в почках — 8,8 мг%.

Выводы

1. Разработан газохроматографический метод идентификации и количественного определения флуоксетина.
2. Применен метод изолирования нейтральным ацетоном для вы­деления флуоксетина из биологического материала. Выход со­ставил около 31%.
3. Проведена апробация изученных методик изолирования и опре­деления флуоксетина на экспериментальном животном.