Одномоментное определение антигенов A и B в минимальных фрагментах волос реакциями абсорбции-элюции и смешанной агглютинации

Publication in electronic media: 15.08.2010 under http://journal.forens-lit.ru/node/188
Publication in print media: Актуальные вопросы судебной медицины и экспертной практики, Новосибирск 2009 Вып. 15

О. Г. Круподерова

г. Петропавловск-Камчатский

Волосы являются одним из видов вещественных доказательств. При исследовании волос приходится решать целый ряд вопросов: при­надлежат ли они человеку или животному, сходство их, с какой части тела человека (животного) взяты, вырваны или выпали, групповая при­надлежность их и т.д.

Для решения указанных вопросов требуются соответствующие методики исследования, неотъемлемой частью которых являются опре­деление групповой принадлежности волос.

С этой целью применяются различные методы, такие как абсор­бция в количественной модификации, абсорбции-элюции, смешанной агглютинации, РИФ. Однако нередко на экспертизу поступает не весь волос, а отдельные его фрагменты, групповую принадлежность кото­рых определить несколькими сыворотками не представляется возмож­ным. Поэтому с целью определения групповой принадлежности волоса длиной 0,5 см мы применили реакции абсорбции-элюции и смешанной агглютинации с одномоментным использованием сывороток анти-А, и анти-В, которые смешивали в пробирке в равных объемах и оставляли на один час при комнатной температуре.

1. Реакция абсорбции-элюции

Волос размером 0,5 см помещали на предметное стекло, расщеп­ляли и наносили каплю 10% раствора альбумина, после высыхания ко­торого, к препаратам добавляли две капли смеси изосывороток анти-А и анти-В. Препараты выдерживали в течении 18 часов во влажных ка­мерах при температуре +4°С. Промывание осуществляли охлажденным раствором хлорида натрия. Для проведения стадии элюции препараты заливали 2-3 каплями изотонического раствора хлорида натрия, после чего экспонировали во влажных камерах в термостате при температу­ре +50°С 30 минут, а затем полтора часа выдерживали при комнатной температуре. Спустя указанный срок часть жидкости с кусочком волоса переносили на другое предметное стекло. К жидкости, находящейся на первом предметном стекле, приливали одну каплю 0,2 % взвеси трижды отмытых эритроцитов группы А на 1% растворе альбумина, а к жид­кости на втором предметном стекле взвесь эритроцитов группы В. Экс­позиция составляла 20 минут при комнатной температуре во влажных камерах. Во все препараты добавляли по одной капле изотонического раствора натрия хлорида, препараты накрывали покровным стеклом и микроскопировали. С целью контроля вводили волос, взятый от челове­ка с первой группой крови.

2. Определение групповой принадлежности волос методом смешанной агглютинации

Отрезок волоса 0,5 см помещали на предметное стекло, расщеп­ляли и заливали 1-2 каплями 10% раствора альбумина после высыхания которого, на препарат наносили смесь изосывороток анти-А и анти-В. Предметные стекла помещали во влажные камеры и 18 часов содер­жали при температуре +4°С. Спустя указанный срок, часть жидкости с кусочком волоса переносили на другое предметное стекло. Затем на каждый препарат наносили по одной капле трижды отмытых цельных эритроцитов (соотношение между объемами сывороток и эритроцитами составлял 20:1). Ингредиенты смешивали стеклянной палочкой, накры­вали покровным стеклом и помещали во влажные камеры. Экспозицию в течении трех часов проводили при температуре +4°С, затем объекты промывали, для этого с одной стороны покровного стекла помещали кусок фильтровальной бумаги, а с другой — пастеровской пипеткой ка-пельно вводили изотонический раствор хлорида натрия до тех пор, пока вся имеющаяся сыворотка и плавающие эритроцитарные конгломера­ты не заменялись им. Учитывались только конгломераты эритроцитов тесно связанные с объектом исследования, которые даже при сильном надавливании на покровное стекло не отходили от объекта.

Таким образом, указанные методы определения групповой прина­длежности волос дают возможность эффективно и достаточно просто, выявлять группу в мельчайших объектах, которыми могут являться во­лосы. При этом неспецифическая агглютинация отсутствовала.