Обнаружение цефазолина в биоматериале

Publication in electronic media: 15.08.2010 under http://journal.forens-lit.ru/node/190
Publication in print media: Актуальные вопросы судебной медицины и экспертной практики, Новосибирск 2009 Вып. 15

Л. А. Маслова, Н. Г. Жукова, Д. А. Фадеев

г. Кемерово

Цефазолин [3- ( 5- метил- 1, 3, 4- тиадиазолил- 2- тиометил)- 7-(тетразолил- ацетамидо)- 3 - цефем- 4)- карбоновая кислота — является одним из основных цефалоспоринов первого поколения антибиотиков, влияющих бактерицидно на грамположительные и грамотрицательные бактерии, в том числе на стафилоккоки, образующие и не образующие пенициллиназу, на гемолитические стрептококки, пневмококки, сальмо­неллы, палочку дифтерии и др.

Цефазолин не всасывается при приеме внутрь. При внутримы­шечном введении препарат быстро всасывается, максимальная кон­центрация в крови отмечается через 1 час; эффективная концентрация после однократной дозы сохраняется в плазме крови в течении 8 — 12 часов. Выделяется в основном (около 90%) почками в неизменном виде.

В практике нашей лаборатории были случаи обнаружения лекарс­твенного препарата «цефазолин» в биоматериале.

Изолирование биоматериала проводилось по методу Васильевой. Кислая вытяжка (рН=2) экстрагировалась хлороформом. При этом цефазолин экстрагировался в кислое извлечение.

Обнаружение цефазолина проводили методами тонкослойной и жидкостной хроматографии,

1. Тонкослойная хроматография

Исследования проводились на пластинах с закрепленным слоем силикагеля марки 60g (фракция 5 :- 45 мкм с 12% гипса) и на пластинах для тонкослойной хроматографии российского производства ЗАО «Сорбполимер» марки «Sorbfil» (ПТСХ — АФ — А / ПТСХ — АФ — А -УФ). Нами использовались следующие системы растворителей: нейтральные — бензол (старт), хлороформ- ацетон { (9:1) (Rf=0,45) }, хлороформ-этанол { ( 7:3 ) (Rf=0,40 и 0,69 ) }, щелочная — диоксан-хлороформ-ацетон-25% раствор гидроокиси аммония {(47,5:45:6,5:2,5) (Rf=0,14)}. Хроматограммы детектировались в Уф-свете (гашение флуоресценции) и модифицированным реактивом Драгендорфа (пятна коричневато-оранжевого цвета).

2. Спектрофотометрия в УФ - области

Спектральную характеристику цефазолина определяли на спект­рофотометре СФ-46 в диапазоне длин волн 220-350нм в кювете с тол­щиной рабочего слоя 10мм. В 0,1н растворе соляной кислоты наблюдали резко-выраженный максимум поглощения абсорбции при длине волны 301нм, в щелочной среде гидроксида натрия максимум поглощения так­же резко выражен, но в диапазоне длин волн 278-288нм.

3. Метод жидкостной хроматографии

Исследовали 1 мкл раствора цефазолина, изолированного при рН=2, на хроматографе «Милихром-АО2».

Режим хроматографирования: колонка 75x2 мм, заполнена обращенно-фазовым сорбентом ProntoSIL-120-5-C18, детектирование при длинах волн 210 (опорная), 220, 230, 240, 250, 260, 280, ЗООнм; реге­нерация 5% раствором ацетонитрила в растворе А - 600 мкл, градиент - от 5 до 69% ацетонитрила в растворе А до 2700 мкл, далее 100% ацетонитрил до 3000 мкл. Скорость элюирования 100 мкл/мин; частота де­тектирования 0,18 сек. На хроматограмме (при обработке следующие параметры распознавания по спектрам: доверительное окно удержи­вания 10%; метод вычисления спектров — наилучшей чистоты; отчет о возможных кандидатах, разрешенных только по времени-да; только кандидатов с меньшим углом - 5,00), наблюдали пик с объемом удержи­вания 794,94 мкл и спектральными характеристиками при длинах волн - 210 (опорная), 220,230, 240,250, 260,280, 300 нм - 0,789, 0,578,0,465, 0,377, 0,311, 0,967 и 2,644.

Таким образом, применяемые в нашей лаборатории физико-хими­ческие методы исследования позволяют идентифицировать цефазолин в биоматериале.