Изолирование тианептина из биологических объектов при судебно-химическом исследовании

Publication in electronic media: 21.06.2010 under http://journal.forens-lit.ru/node/174
Publication in print media: Актуальные вопросы судебной медицины и экспертной практики, Новосибирск 2009 Вып. 15

Н. Н. Кнауб, Л. Е. Кудрикова, О. П. Бирюков

г. Барнаул

Тианептин (Coaxil, Stablon и др.) - трициклический антидепрес­сант, оказывающий тимоаналептическое и анксиолитическое действие, применяется для лечения депрессий различной этиологии. Механизм действия препарата связывают с повышением обратного захвата серотонина нейронами коры головного мозга и гиппокампа. Употребление препарата улучшает настроение, устраняет двигательную заторможен­ность, повышает общий тонус организма, нормализует поведение боль­ных алкоголизмом в период абстиненции, в терапевтических дозах не вызывает привыкания.

С декабря 2006 года препарат поставлен на предметно-количест­венный учет и в аптеках отпускается только по рецептам врача. Причи­ной этому явилось применение тианептина в качестве одурманивающего средства наркозависимыми людьми. Взрослому человеку для достиже­ния состояния эйфории необходима доза около 250-375 мг (около 20-30 таблеток). Известны случаи смертельных отравлений тианептином при передозировке (Дюкова Г., 1997, Литвинов Э., 1998)

По химической структуре тианептин является производным ди-бензотиазепина (7-[(3-хлоро-6,1] дигидро-5,5-диоксо-6-метилдибензо-[c,f][1,2] тиазепин 11-у1) амино] гептановая кислота).

Препарат имеет в структуре третичный, вторичный атомы азота, карбоксильную группу и обладает амфотерными свойствами. Это об­стоятельство создает определенные трудности при изолировании тианептина из биологических объектов.

Методы химико-токсикологического анализа тиопентина недоста­точно изучены и нуждаются в дополнительной разработке.

Целью настоящей работы явилось изучение условий экстракции тианептина из биологических объектов.

Материалы и методы исследования

Изучение условий извлечения тианептина из водных растворов проводили, используя универсальные буферные растворы со значением рН среды от 2 до 10 (Лурье Ю. Ю., 1979).

Качественное и количественное определение тианептина осу­ществляли на жидкостном микроколоночном хроматографе марки «Милихром-А-02». Условия хроматографического анализа: колонка размером 2x75 мм, с обращенно — фазовым сорбентом Silasorb SPH 5С18, зернением 5 мкм. Детектирование проводили при 200, 220, 270, 300 нм. В качестве подвижной фазы использовали: элюент А — рас­твор кислоты трифторуксусной (ТФУ) 0,1%, элюент Б — ацетонитрил 100%. Хроматографирование проводили при использовании градиента концентраций от 10% до 80% ацетонитрила при скорости потока 150 мкл/мин и температуре колонки 35°С. Продолжительность анализа 10 мин.

Результаты исследования и их обсуждение

Для разработки условий качественного и количественного анализа тианептина методом ВЭЖХ использовали спиртовой раствор тианепти­на с концентрацией действующего вещества 200 мкг/мл. Анализ прово­дили методом ВЭЖХ при условиях, описанных ранее. Идентификацию тианептина проводили по времени удерживания, объему удерживания, спектру абсорбции и спектральным отношениям относительно базовой длины волны 200 нм. Данные хроматографического анализа представ­лены на рис. 1.

Рис. 1 Определение тианептина методом ВЭЖХ

Как видно из приведенной хроматограммы, время удерживания тианептина составило 7 мин 42 сек. Анализ спектральной кривой пока­зал, что тианептин имеет выраженный максимум абсорбции при 205 нм и плато в диапазоне длин волн от 225-230 нм и 265-275 нм (рис. 2).

Рис. 2 Спектр абсорбции тианептина

Параметры удерживания, спектральные отношения тианептина представлены в таблице 1.

Таблица 1

Параметры удерживания и спектральные отношения для тианептина

Изучение влияния рН среды на степень извлечения тианептина в органический растворитель проводили с использованием универсаль­ной буферной смеси. Для этого к буферному раствору с заданным зна-чением рН среды (от 1 до 10) добавляли раствор тианептина. В качестве экстрагента использовали диэтиловый эфир. Пробы встряхивали, цент­рифугировали, количественно отделяли фазу органического растворите­ля. Диэтиловый эфир испаряли на водяной бане при нагревании, сухой остаток растворяли в спирте этиловом 95% и исследовали далее. Полу­ченные данные исследований представлены на рис. 3.

Рис. 3 Зависимость экстракции тианептина в эфир от значения рН среды водной фазы

Результаты проведенного эксперимента свидетельствуют о том, что оптимальное значение рН среды для извлечения тианептина в ор­ганический растворитель из водной фазы находится в пределах 6 — 9. При экстракции вещества из кислой среды (рН 2—3) степень извлече­ния резко уменьшается. Увеличение рН среды до 10 и более также при­водит к снижению выхода тианептина.

Полученные данные брали во внимание при изучении вопросов изолирования тианептина из биологических объектов общими метода­ми (по Васильевой и по Карташову). Исследование проводили на мо­дельных образцах ткани печени по методикам, описанным в литературе (Карташов В. А., 1988, Швайкова М. Д., 1975).

Учитывая амфотерный характер тианептина, исследовали извле­чение из кислой и щелочной среды.

Количественное определение проводили методом ВЭЖХ в усло­виях описанных ранее. На хроматограммах полученных в результате исследования наблюдали пик с параметрами удерживания и спектраль­ными отношениями соответствующими тианептину. Расчет количест­венного содержания проводили по стандарту. Результаты обрабатывали относительно площади пика тианептина, соответствующего 200 мкг (100%) (табл. 2)

Таблица 2

Количество тианептина, извлеченного из биологического материала по методу Васильевой и Карташова

Как видно из данных, представленных в таблице 2, тианептин присутствует как в кислом, так и в щелочном извлечениях. Учитывая полученные результаты, необходимо отметить, что при использовании общих методов изолирования для извлечения тианептина, целесооб­разно объединять кислые и щелочные извлечения. В этом случае метод Карташова предпочтительнее метода Васильевой, так как дает более вы­сокий суммарный выход (около 37%).

Выводы

1. Изучено влияние рН среды и природы органического раствори­теля на экстракцию тианептина из водных растворов.
2. Разработаны условия идентификации и количественного опре­деления тианептина методом ВЭЖХ.
3. Показана возможность использования некоторых общих мето­дов изолирования для выделения тианептина из биологических объектов.
4. Проведена сравнительная оценка эффективности общих мето­дов изолирования по Васильевой и Карташову применительно к тианептину.