Изолирование из биологического материала и идентификация нимесулида

Publication in electronic media: 20.10.2011 under http://journal.forens-lit.ru/node/391
Publication in print media: Актуальные вопросы судебной медицины и права, Казань 2010 Вып. 1

Нимесулид является нестероидным противовоспалительным средством из класса сульфонанилидов. Связывание с белками плазмы составляет 99%, объем распределения 0,19-0,35 л/кг. Нимесулид метаболизируется в печени с образованием активного компонента 4-оксинимесулида, в основном выделяется с мочой (70%) и калом (30%). Выпускается в виде таблеток. Таблетка содержит 100 мг нимесулида.

Описания методов извлечения нимесулида из трупного материала и его идентификации в доступной литературе нам не встречались. Цель нашего ис-следования – возможность изолирования нимесулида при скрининг-анализе трупного материала на лекарственные вещества, методы и возможность идентификации, количественное определение. Для проведения исследования 100 г трупного материала (печень), не содержащего нимесулида, измельчали до состояния гомогената, добавляли раствор нимесулида с концентрацией 2,9 мг, тщательно перемешивали и оставляли при комнатной температуре на 15 часов. Изолирование проводили подкисленной водой по методу А.А. Васильевой. Нимесулид из кислой среды экстрагировали смесью хлороформ-этиловый эфир (2:1), из основной среды – смесью хлороформ-бутиловый спирт (9:1). Вытяжка из кислой среды имела вид бесцветной прозрачной жидкости, из основной среды – вид прозрачной жидкости с желтоватым оттенком. Идентификацию нимесулида производили методами тонкослойной хроматографии, газожидкостной хроматографии, спектрофотометрии. Тонкослойную хроматографию проводили в тонком слое сорбента на пластинках Сорбфил ПТСХ-ПВ-УФ. Результаты ТСХ исследования сведены в таблицу.

Таблица. Результаты проведенного ТСХ исследования экстрактов

При использовании систем растворителей, обладающих основными свойствами, пятно нимесулида имеет собственное желтое окрашивание. В качестве проявителя применяли реактивы: 1) 30% раствор гидроксида натрия, 2) смесь 1% раствора сульфата меди и 1% феррицианида калия, 3) 1% раствор перманганата калия в 0,2 н серной кислоте. При этом наблюдали появление окрашенных пятен с реактивом: 1 – желтого цвета, 2 – сине-голубого цвета, 3 – желтого цвета на малиновом фоне. Нимесулид идентифицировался в экстракте как из кислой, так и из основной среды.

Идентификацию методом газожидкостной хроматографии проводили на хроматографе Кристаллюкс-4000. Колонка капиллярная SE-54, температура колонки 240 ºС, детектора 250 ºС, инжектора 250 ºС. Поток газа-носителя азота 30 мл/мин. Детектор ПИД. Объем вводимой пробы 2 мкл. При данных условиях хроматографирования наблюдали пик с относительным временем удерживания 5,1 (внутренний стандарт дифениламин, время выхода 3,65 мин).

Спектрофотометрическое исследование проводили на спектрофотометре СФ-56 методом сканирования волн от 190 до 450 нм. В качестве растворителя применяли 0,1 н раствор гидроксида натрия. Толщина кюветы 1 см. Исследовали экстракты кислого и основного характера. Нимесулид в растворе гидроксида натрия имеет максимум поглощения на длине волны 395 нм.

Количественное определение нимесулида проводили методом спектрофотометрии в 0,1 н растворе гидроксида натрия.

Результаты проведенного исследования свидетельствуют, что при использовании экстракции по методу А.А. Васильевой из биологического материала выделяется из кислой среды (рН 2) 20%, а из основной среды (рН 9) – 25% введенного в биологический объект нимесулида. Нами также определены значения Rf нимесулида для некоторых систем ТСХ, возможность идентификации на газожидкостном хроматографе и количественного определения нимесулида спектрофотометрическим методом.