Судебно-медицинское исследование частиц перхоти

Publication in electronic media: 22.10.2011 under http://journal.forens-lit.ru/node/401
Publication in print media: Актуальные вопросы судебной медицины и права, Казань 2010 Вып. 1

А. К. Михеева

ГКУЗ «Республиканское бюро судебно-медицинской экспертизы МЗ РТ»

При судебно-медицинском исследовании анализ микроследов биологических выделений человека представляет собой сложную задачу, успех решения которой закладывается на этапе криминалистического осмотра предмета экспертизы и отбора объектов.

Одним из объектов, исследованию которого до последнего времени уделялось недостаточно внимания, является перхоть, которая представляет собой чешуйки из находящихся на различных стадиях кератинизации клеток верхних слоев эпидермиса. У здоровых людей на волосистой части головы можно обнаружить незначительное количество частиц перхоти. Однако их количество резко возрастает при воспалительных процессах, когда усиливается митотическая активность базального слоя и, соответственно, этап кератизации полностью не завершается. Это приводит к тому, что в частицах перхоти можно обнаружить клетки, содержащие ядра. Тем самым существует возможность при анализе данного биологического следа определения как групповой принадлежности, так и молекулярно-генетических характеристик. Учитывая, что наличие перхоти – достаточно распространенное явление, можно предполагать, что при правильном отборе и пробоподготовке данное исследование может активно использоваться в практике.

Обычно частицы перхоти встречаются на таких предметах, как шапки, маски, воротники пальто и пиджаков и т.п. При осмотре этих предметов под стереомикроскопом можно обнаружить блестящие частицы перхоти белого или слегка желтого цвета, значительно отличающиеся по своему внешнему виду от частиц почвы, пыли, микроволокон и т.п. Эти частицы можно отобрать с помощью препаровальной иглы. Отбор частиц должен производиться в маске, шапочке и перчатках, чтобы не допустить попадания частиц перхоти самого исследователя на предмет экспертизы или в пробирку. Так как в настоящее время не существует каких-либо объективных методов отнесения микрочастиц именно к перхоти, её отбор осуществляется только по морфологическим признакам под стереомикроскопом и сильно зависит от опыта исследователя.

Возможность наличия на предмете исследования частиц перхоти, принадлежащих разным людям, диктует необходимость очень тщательно проводить осмотр предметов и отбор частиц. Частицы, обнаруженные на наружной и внутренней поверхности, следует разносить в разные пробирки и в последу-ющем исследовать как отдельные образцы. По возможности следует отбирать крупные частицы, которые иногда можно разделить и исследовать параллельно несколькими методами. В то же время мелкие частицы необходимо объединять для проведения одного исследования.

По сравнению с другими биологическими следами (потожировые выделения, выпавшие волосы), встречающимися на шапках или других подобных предметах, частицы перхоти обладают рядом преимуществ. Они могут содержать определенное количество ядерной ДНК, что допускает проведение молекулярно-генетических исследований и сразу повышает доказательность получаемой информации, а, в отличие от следов слюны, которые могут быть на шапках-масках, но точное место расположения которых сложно обнаружить, частицы перхоти четко различимы и могут обнаруживаться в большом количестве. В доступной литературе данных по анализу частиц перхоти мало.

Отбор и пробоподготовка частиц. Все исследования по отбору частиц необходимо проводить под стереомикроскопом. Частицы перхоти можно отобрать с помощью препаровальной иглы, смоченной в этаноле, и поместить в пластиковую пробирку с этанолом.

Для определения групповой принадлежности одну крупную или две мелкие частицы перхоти переносят на участок липкой ленты типа «Пренабанд». Можно использовать ленту для заклейки планшет для иммунологических реакций или другую ленту, липкий слой которой не препятствует проведению иммунологических реакций. На частицы перхоти наносят небольшое количество дистиллированной воды (2-3 мкл, чтобы избежать прилипания пробирки к липкой ленте), после чего под стереомикроскопом их «размазывают» на небольшой площади (3х3 мм) с помощью стеклянной пробирки. Из ленты вырезают участок 5х5 мм с нанесенной перхотью, помещают его на предметное стекло. Приготовленные таким образом препараты используют для проведения реакции абсорбции-элюции. Реакцию проводят с использованием моноклональных антител анти-А А3, анти-В В8, анти-Н Н44 титр 1:512 (соответственно анти-А слабая, анти-В СМ, анти-Наб эритротест-цоликлон ООО «Гематолог»). Абсорбцию проводят 2 часа при температуре +4 °С во влажных камерах. Затем участки липкой ленты отмывают в охлажденном изотоническом растворе 6 раз по 5 мин. Элюцию проводят в 0,1% взвесь тест-эритроцитов 30 мин при температуре +48 °С. Экспозиция при комнатной температуре 30 мин. Результаты учитывают микроскопически.

Возможно также проведение РАЭ на стеклах. Для этого отмытые пробы или отдельные частицы переносят на предварительно обезжиренные стекла (по 1-2 частицы перхоти для каждого реагента) и растирают под стереоскопом при помощи пробирки до однородного состояния. Препараты фиксируют этанолом 20 мин. Выявление антигенов системы АВО проводят реакцией абсорбции-элюции с вышеуказанными моноклональными антителами. Абсорбцию антител проводят в течение двух часов при температуре +4 °С во влажных камерах. По окончании абсорбции несвязавшиеся антитела удаляют промыванием препаратов охлажденным изотоническим раствором хлорида натрия 2 раза по 10 мин. После этого препараты споласкивают холодной водой и подсушивают. Элюцию свя-завшихся антител проводят в 0,1% взвеси соответствующих тест-эритроцитов при температуре +48 °С в течение 30 мин. Экспозиция при комнатной температуре 1 час. Учет результатов микроскопический.

При исследовании части перхоти в нашей лаборатории брались образцы частиц перхоти от заведомо известных лиц каждой группы крови по системе АВО. Четко выявить в них соответствующий антиген пока не удалось. В настоящее время в лаборатории проводятся эксперименты по отработке методики и подбору сывороток для исследования (для определения антигенов в частицах перхоти).